Молекулярные механизмы морфогенеза - Банников Г.А.
Скачать (прямая ссылка):
Полная аминокислотная последовательность тенасцина кур содержит ведущий пептид (аминокислоты 1-22) и про-пептид (остатки 23-33). Последовательность, начинающаяся с "зрелого" N-конца - глутаминовой кислоты в 34 положении и до 118 остатка, входит в состав центрального домена вместе с аналогичными последовательностями других субъединиц. Остатки со 119 по 147 образуют a -спираль, которая закручивается в тройную спираль при участии двух других субъединиц триплета и стабилизируется междепочеч-ными дисульфидными связями. Далее с 176 по 590 остатки идут 13 с половиной цистеин-богатых повтора, подобных таковым в эпидермальном факторе роста (ЭФР-подобные повторы ), которые составляют тонкую часть "руки" тенасцина, затем следуют 11 сегментов,сильно напоминающих друг друга, и фибронектиновые повторы III типа. На С-конце об- с
наружена 81-членная последовательность, сходная с фраг- *
ментом /3- и у -цепей фибриногена, которая образует гло- с
булярный домен. Один из фибронектиновых повторов III типа содержит единственную последовательность RRGDME» Изоформа с мол. массой в 200 кД отличается от изоформы с
мол. массой 230 кД отсутствием 6-го и 7-го повторов lit типа, о в нэоформе с мол. массой 190 кД, кроме того отсутствует и 8-й повтор. В молекуле имеется 17 потенциальных сайтов N -гликозилироваиня, 6 из которых расположены В 6-м и 7-м сплайсируемых повторах /ГГ типа. (3 14, 485 589 3»
Тенасцин (цитотактин), экстрагированный из мозга куриных эмбрионов, отличается от тенасцина других тканей присутствием углеводного эпитома HNK-1. Кроме того, в мозге обнаружена форма тенасцин а с мол. массой 250 кД, содержащая .хокдроитин-сульфат [273]. "Руки' тенасцина человека и крысы длиннее, чем у тенасцина кур, что соответственно отражается на мол, массе наибольшей субъединицы: для человека она составляет 320 кД, а для крысы - 280 кД [181]. Лигандами тенасцина во внеклеточном матриксе мозга является специфический хондроитинсульфатпротеогликан-несущий углеводный эпитоп HNK — 1«Мол. масса белковой части этого протеогликана составляет 280 КД (2753. На поверхности мезенхимальных клеток идентифицирован тенасцин-свяэыолю-щий протеогликан - синдикан [639а]. Вопреки сообщению о связывании тенасцина с фибронектином в ELISA-тесте [ 1 OS 1. in situ эти 2 гликопротеине., скорее всего, не связываются друг с другом.
Закономерности экспрессии тенасцина крайне необычны, С одной стороны, его экспрессия во многих эмбриональных тканях весьма лабильна и подчиняется строгим ограничениям во времени и пространстве, С другой стороны, во взрослом организме тенасцин постоянно присутствует в таких стабильных образованиях, как сухожилия н надкостница (1813.
Наиболее полное исследование распределения тенасцина (цитотактина) выполнено на зародышах кур [13С]. Тенаохин впервые появляется во время гаструляцин. В районе мигрирующих клеток первичной полоски окрашивание антителами к тенасцину выглядит пунктирным, тогда как в той области, где гаструляция уже завершена, антитела непрерывно окрашивают базальную мембрану, разделяющую хордо-мезодерму (будущею хорду) от эпителия будущей нейральной пластинки.
При дальнейшем развитии тенасцин обнаруживается вокруг нервной трубки и корды, при этом он отчетливо выявляется в базальной мембране этих образований в переднем конце тепа и в туловище, но полностью отсутствует в заднем конце тела, даже в тех районах, где хорда уже полностью сформирована, и окрашивание на фибронектин очерчивает как нервную
трубку, так н хорду ,[ 130 ] . По дорзо-вентралыюй оси нервной трубки тенасцин также распределен градиентно [68]. Сходная картина наблюдается в сомитах. Тенасцин окружает только уже полностью сформированные сомиты передней и сродней части тела, тогда как фибронектин очерчивает и более каудально расположенные сомиты, находящиеся в стадии формирования. В тех сомитах, которые окружены тенасци-ном, окраска каудальной границы сомита много интенсивнее, чем ростральной. При реорганизации сомитов на склеротом и миотом тенасцин начинает экспрессироваться в ростральной части склеротома. Вскоре после этого именно в экспрессирующую тенасцин часть склеротома, а не в более каудальную его часть, мигрируют клетки нервного гребня [614].
Индукция экспрессии тенасцина в ростральной порции склеротома происходит несколько раньше, чем туда мигрируют клетки нервного гребня и независимо от их миграций.
У зародышей, экспериментально лишенных клеток, нервного гребня, сохраняется та же самая последовательность экспрессии тенасцина при образовании склеротома [614]. На этой, как, впрочем, и на последующих стадиях, зоны экспрессии тенасцина гораздо уже и специфичнее, чем районы экспрессии фибронектина.
Иммуноморфологическое изучение экспрессии тенасцина на более* ранних стадиях миграции клеток нервного гребня так же создает впечатление, что тенасцин участвует в контроле этого процесса. По данным М. Brouner-Fraser, (1988), па протяжении процесса’ миграции тенасцин колокализуется с клетками нервного гребня куриных эмбрионов, которые, по-видимому, содержат его на своей поверхности. Аналогичные результаты получены и при исследовании миграции клеток нервного гребня у куропаток, крысы и амфибий [180, 402]. Введение антител к тенасцину латеральнее нервной трубки на уровне будущего среднего мозга приводит к эктопической аггрегации клеток нервного гребня [68].
