Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Айала Ф. -> "Современная генетика. Том 2" -> 95

Современная генетика. Том 2 - Айала Ф.

Айала Ф. , Кайгер Дж. Современная генетика. Том 2 — М.: Мир, 1988. — 368 c.
ISBN 5-03-000495-5
Скачать (прямая ссылка): sovremennayagenetikat21988.djvu
Предыдущая << 1 .. 89 90 91 92 93 94 < 95 > 96 97 98 99 100 101 .. 164 >> Следующая

ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC
GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA
ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC
GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA
ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC
GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA
ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC
GGTGACGCGT GTGGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTGGCCTCGA
ACACCGAGCG ACCCTGCAGC GGTGACGCGT GTCGCCTCGA ACACCGAGCG ACCCTGCAGC
Ген дикого типа
LS -119/-10? LS -115/-105 Lb -И1/-101 LS -105/-95 LS -95/-85 LS -84/-74
LS -80/-70 LS -79/-69 LS -70/-6I LS -59/-49 LS -5б/-4б LS -47/-37 LS -
43/-33 LS -29/-13 LS -21/-12 LS -16/-6 LS -7/ + 3 LS +5/+ 15
Экспрессия генетического материала
экспрессироваться во многих типах эукариотических клеток, о чем
свидетельствует инфекционная активность вируса по отношению к широкому
спектру эукариотических организмов, а также способность воспроизводиться
в соматических клетках многих типов тканей. Во всех случаях на 5'-конце
РНК-транскрипта гена tk обнаруживается одна и та же последовательность,
что указывает на способность промотора tk функционировать идентично в
разных типах эукариотических клеток.
Для идентификации в 5'-фланкирующей последовательности нуклеотидов,
вовлеченных в регуляцию транскрипции гена tk, можно было бы вводить
мутации в каждое положение. Такой подход оказался бы чрезвычайно
трудоемким. Более эффективный метод, названный лин-керным сканированием,
был использован в работе Мак-Найта и его коллег. Этот метод (рис. 16.2)
включает создание в клонированном гене tk двух наборов делеций-с левого и
с правого конца клонированной последовательности. Протяженность делеции в
каждом делеционном варианте фиксировали с помощью определения
нуклеотидной последовательности. Были получены 43 различные делеции с 5'-
конца и 42-с З'-конца, вошедшие в состав мутагенизированных таким образом
генов tk (рис. 16.2). С использованием подходящих делеционных мутантов из
каждого набора можно было сконструировать гены, содержащие мутации
замещения и отличающиеся от нормальной последовательности tk в десяти или
менее положениях нуклеотидных пар. Некоторые из этих мутантных
последовательностей показаны на рис. 16.3.
В каждом случае влияние замещения определенных участков
последовательности на эффективность транскрипции определяли, инъецируя
очередную конструкцию, состоящую из клонирующего вектора pBR322 со
встроенным мутантным геном tk, в ядра ооцитов Xenopus. После 24 часов
инкубации из ооцитов экстрагировали суммарную РНК и определяли в ней
содержание и структуру транскрипта гена tk. Результаты, представленные в
табл. 16.2, позволяют выявить три участка в 5'-флан-кирующей
последовательности, необходимые для эффективной транскрипции гена tk
(отмечены на рис. 16.4). Более того, оказалось, что участок,
расположенный ближе других к точке инициации и содержащий
Таблица 16.2. Эффективность транскрипции мутантных генов tk, показанных
на рис. 16.3, в ооцитах Xenopus
Мутант Эффективность экспрессии Мутант Эффективность
экспрессии
LS-119/-109 1,20 LS-59/-49 0,08
LS-115/-105 1,36 LS-56/-46 0,11
LS-111/-101 0,04 LS-47/-37 1,27
LS-105/-95 0,03 LS-42/-32 0,68
LS-95/-85 0,12 LS-29/-18 0,06*
LS-84/-74 0,09 LS-21/-12 0,07
LS-80/-70 0,87 LS-16/-6 0,96
LS-79/-69 0,70 LS-7/+3 1,04*
LS-70/-61 0,94 LS+5/ + 15 1,18*
* Транскрипция начинается в точке, отличной от нормальной транскрипции.
По McKnight S.L., Kingsbury R., 1982. Science, 217, 316. точки
инициации
16. Регуляция экспрессии генов у эукариот
213
Вторая дистальная Первая дистальная Проксимальная
последовательность последовательность последовательность
-105 -80 -61 -47 -52 (ТАТА) _]g Сайт кэпирования
• >
tk мРНК
Рис. 16.4. Нуклеотидные последовательности, существенные для транскрипции
гена tk. Идентификация этих последовательностей основана на данных по
транскрипции клонированных мутантных генов, показанных на рис. 16.3, в
ооцитах Xenopus. (По Knight S.L., 1982. Cell, 31, 355.)
TATА-последователыгость, необходим для точного выбора начальной точки
транскрипции. Изменения в этом участке приводят к тому, что транскрипция
инициируется на других нуклеотидах и с гораздо более низкой частотой.
Рассмотренные эксперименты убедительно свидетельствуют о том, что район,
содержащий ТАТА-последовательность, образует функционально важные
контакты с РНК-полимеразой И, необходимые для ориентации фермента в
положении, позволяющем ему начать транскрипцию с правильной точки. Точное
функциональное значение более отдаленных участков, отмеченных на рис.
16.4, представляется не столь очевидным. Соблюдение фиксированного
расстояния между дистальными участками и ТАТА-последовательностью не
является необходимым условием эффективной транскрипции (вспомним, что
расстояние между участками - 10 и - 35 в прокариотических промоторах,
Предыдущая << 1 .. 89 90 91 92 93 94 < 95 > 96 97 98 99 100 101 .. 164 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed