Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Айала Ф. -> "Современная генетика. Том 2" -> 93

Современная генетика. Том 2 - Айала Ф.

Айала Ф. , Кайгер Дж. Современная генетика. Том 2 — М.: Мир, 1988. — 368 c.
ISBN 5-03-000495-5
Скачать (прямая ссылка): sovremennayagenetikat21988.djvu
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 164 >> Следующая

множество на общем уровне.
Эффективность трансляции мРНК ~10 на уровне определенных генов;
множество на общем уровне.
Составлено по Darnell J.E., 1г. 1982. Nature, 297, 365.
может осуществляться как на уровне самой транскрипции, так и на уровне
сплайсинга. Более того, ДНК в эукариотических клетках организована в
нуклеосомы, которые в свою очередь формируют хромати-новые структуры
более высокого порядка (см. гл. 4). В зависимости от локальной структуры
хроматина данные участки ДНК могут находиться в состоянии, доступном или
недоступном для действия РНК-полимеразы, то есть структура хроматина
также может влиять на регуляцию транскрипции. В табл. 16.1 приведены
возможные уровни регуляции эукариотических генов и сведения о количестве
примеров, на которых удалось показать реализацию того или иного уровня
регуляции. Кроме того, так как у эукариот транскрипция не сопряжена
непосредственно с трансляцией, то возможен и фактически реализуется
цитоплазматический контроль использования регуляторных мРНК. Все эти
контролирующие и регуляторные механизмы, без сомнения, требуют участия
специализированных белков (и, возможно, некоторых молекул РНК),
действующих на соответствующие регуляторные участки ДНК или РНК. В
настоящее время сведения о природе этих регуляторных молекул весьма
ограничены. Однако есть основания полагать, что в ближайшие годы наши
представления в этой области могут существенно расшириться.
Участки ДНК, контролирующие транскрипцию
По аналогии с прокариотами можно ожидать, что в инициации транскрипции
эукариотических генов должны участвовать промоторные последовательности,
расположенные в ДНК недалеко от точки инициации синтеза РНК (с 5'-конца
данного гена). С использованием методов, описанных в гл. 9, удалось
клонировать значительное количество структурных генов из различных
эукариотических клеток и их вирусов. Сравнение 5'-фланкирующих
последовательностей этих генов позволило выявить очень характерную А-Т-
богатую последовательность, распо-
16. Регуляция экспрессии генов у эукариот
209
от -33 до -27
Gii С,ь CZ2 Т37 А3д Т37
т8 Т" с" С3 Т, а4
А* с7 Л7 G, с,
С" л7 т3
5' -Т А т
1 2 3
Обобщенная
Рис. 16.1. Сравнение 5'-фланкирую-щих последовательностей для 41
эукариотического гена. Цифровые индексы соответствуют числу случаев, в
которых данный нуклеотид занимает данное положение в некодирующей цепи
ДНК (то есть в той, которая комплементарна цепи, служащей матрицей для
синтеза РНК). Соотнесение последовательностей осуществлено по принципу
получения
от-27 до-21
V
А35 Az3 А37 Т30 Al 9 G/9
Т3 Т" Т" Al 4 G" Gio
С3 G" с7 т7
с, т" А,
А А Т А Т-з' A J
4 5 6 7
последовательность
максимального сходства, поэтому, как отмечено в верхней строке,
наблюдаются определенные различия в расстояниях меЖду данным нуклеотидом
и точкой начала транскрипции (первый транскрибируемый нуклеотид имеет
номер + 1). Внизу приведена обобщенная (consensus) или так называемая
ТАТА-последовательность. (По Corden I. et al, 1980. Science 209, 1406.)
лагающуюся, как правило, за 20-30 нуклеотидов до точки начала
транскрипции. Этот участок, названный Гольдберг-Хогнесс-боксом (по
аналогии с Прибнов-боксом прокариот) или просто "ТАТА"-последова-
тельностью, показан на рис. 16.1. Наличие такой последовательности
характерно для транскрипционных единиц, в считывании которых участвует
РНК-полимераза II.
Изучали способность клонированных генов, включающих 5'-фланки-рующие
последовательности, направлять транскрипцию in vitro и in vivo с
использованием тест-систем, позволяющих оценивать точность инициации
транскрипции в 5'-концевой области клонированных последовательностей.
Таким образом, при работе с клонированными мутантными и нормальными ДНК
удается провести сравнение, позволяющее установить, какие из остатков 5'-
фланкирующей последовательности действительно необходимы для нормального
функционирования промотора. Эти исследования показали, что ТАТА-
последовательность необходима для правильного выбора цепи ДНК и точки
инициации транскрипции. Эта регуляторная последовательность наряду с
другими участками последовательности контролирует также эффективность
инициации транскрипции.
Для осуществления точной транскрипции in vitro недостаточно присутствия
только очищенной РНК-полимеразы II и клонированной последовательности
ДНК. Необходимо также присутствие неидентифици-рованных в настоящее время
белков. Была разработана кроме того удобная система транскрипции in vivo,
основанная на инъекции клонированной ДНК в очень крупные ядра ооцитов
африканской шпорцевой лягушки Xenopus. Инъецированная ДНК связывается с
гистонами
210
Экспрессия генетического материала
Рис. 16.2. Мутагенез in vitro используется для выявления 5'-фланки-рующих
последовательностей, участвующих в контроле транскрипции. На стадии 1
рестрикционный фрагмент ДНК, содержащий ген tk, подвергают расщеплению с
обоих концов экзону-клеазой III и нуклеа-зой SI. Образующиеся продукты
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 164 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed