Современная генетика. Том 2 - Айала Ф.
ISBN 5-03-000495-5
Скачать (прямая ссылка):
указывают на присутствие тех или иных хромосом человека в гибридных
линиях. Единственная хромосома, которая имеется во всех гибридных
клеточных линиях, дающих положительный ответ в блот-гибридизации, и
отсутствует в линиях, дающих отрицательный ответ,-это хромосома 16.
Метод гибридизации по Саузерну, соединенный с подходами, разработанными
для генетического анализа соматических клеток, с успехом применялся не
только для картирования определенных генов (табл. 18.4), но и для
локализации последовательностей ДНК с неизвестными функциями, найденными
в библиотеках генов человека.
u>
•**ч
Kj
Таблица 18.3. Локализация гена химотрипсиногена в хромосоме 16
Линия клеток Экспрессия химотрипсиногена В Хромосомы,
присутствующие в клеточной линии
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 X
1. TSL-2 - - + - - + + - - - +
- + - - - - - + - + + -
+
2. ICL-15 - - ~ - - - - - - -
- - + - - - - + - - + +
- -
3. XER-11 + + - + + - + + + +
+ - + - - + + + + + +
+ -
4. XER-7 - + + + + + + + + + +
- + + + + - - + + - - -
+
5. EXR-3 + + + + + + + + + - +
+ + + + + + + + - + + +
-
6. XER-9 ~ - + + + - - - + - +
- + - + - - + + - - + -
-
7. EXR-9 + + + + + + + + + - +
+ + + + + + + + + + + +
-
8. MAR-2 + + + - + - - + - - +
- - - - + + + - + + + +
+
9. DUA-5 BSAgA - - - + - + ~ - - -
- - - - + - - + + - - +
- -
10. XTR-22 - - + - + + + - + -
+ + - + - + - - + + + +
+ -
11. REX-12 -
+
12. ALR-1BSH6 + + + + + + + + +
+ + + + + + + + - - + +
+ - +
Экспрессия генетического материала
Генетика соматических клеток: картирование генома
313
Таблица 18.4. Человеческие гены и их семейства, картированные с помощью
рестрикционного анализа (некоторые из этих последовательностей ДНК
полиморфны)
Гены Хромосомная локализация Тип* Полиморфизм ДНК
Г омолог C-fos (CFOS) 2 S -
Легкая цепь Igx,(IGK) 2 С -
Проопиокортин (РОС) 2р -
Гомолог C-myb (CMYB) 6 s -
Пролактин (PRL) 6 с -
Коллаген, тип I, а2 (COUA2) 7 -
Гомолог C-mos(CMOS) 8 s -
Гомолог C-myc(CMYC) 8 s -
а-интерферон (IFL) 9pter-12 с -
|3-интерферон (IFF) 9pter-12 s -
Гомолог C-abl(CABL) 9 s -
Гомолог C-ras Н (CRASH) 11р13 s +
Инсулин (INS) 11р15.5-р13 s +
Р-глобин (НВВ) 11р1208-р1205 с +
Гомолог C-rasK(CRASK) 12 s -
Тяжелая цепь 1д(ЮН) 14q32.3 с +
Гомолог C-fes(CFES) 15 s -
а-глобин (НВА) 16pter-pll с +
Химотрипсиноген В (CTRB) 16 -
Гормон роста (GH) Хорионический соматотропин (CSH) и плацентарный
лактоген (PL) 17q21-q ter с
Коллаген типа I, al (COL1A1) 17q21-qter s -
Гомолог C-src(CSRC) 20 s -
Гомолог C-sis(CSIC) 22qll-qter s -
Аргининосукцинатсинтетаза (ASS) Легкая цепь X иммуноглобулина 6, 9, X,
Y** D +
(IGL) 22** D +
Р-тубулин ** D -
* S - Однокопийные гены, С-компактно расположенные семейства тированные
семейства генов. генов, D-диспер-
** Семейства генов, представители которых расположены дополнительно на
каких-
либо еще хромосомах помимо идентифицированных. (Составлено Ruddle F.H.
(1983). Science, 230, 919-924.) по Eustachio P. D.,
Гибридизация in situ
Вышеописанная процедура определения хромосомной локализации генов
включает в себя два основных этапа. Первый этап заключается в
цитогенетической идентификации хромосом или фрагментов хромосом,
присутствующих в гибридной линии клеток. На втором этапе с помощью
гибридизации ДНК, в растворе или по методу Саузерна устанавливают наличие
искомых последовательностей. Более прямой
314
Экспрессия генетического материала
Рис. 18.19. Распределение метки среди хромосом человека после
гибридизации in situ метафазных хромосом с клонированным
I*. I .
фрагментом ДНК ве- ш | ]
личиной 14,9 т. п. н., меченным тритием. Большая часть метки связывается
с концевой областью короткого плеча хромосомы 1.
(По Harper М. Е.,
Sauders G.F., 1981 | | I ¦ <
Chromosoma, 83,
431-439.)
KUsS**""
- I ^ = ¦ S ! S
fiisSSic*
'ж
т *
=
С )
? м
= й
* т-4
v-Д II
10 11 12 13 14 15
R -5 а 5 5 " I
16 17 18 19 20 21 22 у
способ картирования генов заключается в непосредственной гибридизации
между радиоактивными зондами и метафазными хромосомами. Этот метод
гибридизации in situ был разработан для дрозофилы, большие политенные
хромосомы которой, несущие много копий каждого гена, значительно
облегчали этот процесс. С середины семидесятых годов методы гибридизации
in situ были распространены на геном человека. Первоначально этот метод
использовали для картирования тандемных повторяющихся последовательностей
ДНК, например для генов рибо-сомной РНК. В последнее время гибридизацию
in situ удалось применить и для картирования уникальных генов человека.
Принцип этого метода прост. Рассмотрим его на конкретном примере
картирования некоего фрагмента ДНК человека величиной 14,9 т.п.н.,
клонированного на фаговом векторе. Функция этого фрагмента ДНК не ясна.
Известно, что он присутствует в количестве не более одной-двух копий на
гаплоидный геном. Метафазные хромосомы человека, распределенные на
