Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ашмарин И.П. -> "Молекулярная биология, избранные разделы" -> 100

Молекулярная биология, избранные разделы - Ашмарин И.П.

Ашмарин И.П. Молекулярная биология, избранные разделы — М.: Медицина, 1974. — 360 c.
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiya1974.djvu
Предыдущая << 1 .. 94 95 96 97 98 99 < 100 > 101 102 103 104 105 106 .. 164 >> Следующая

ДНК донора присоединяется вначале к поверхности бактерии концами молекулы (Dubnau, Cirigliano, 1972). Далее следует проникновение в клетку, по ходу которого происходит дробление на биспиральные фрагменты с довольно значительным молекулярным весом — до 2—9-10® (по разным данным и для различных размеров исходной ДНК). По-видимому, на этой стадии дробление происходит под действием эндонуклеаз на внешней стороне оболочки или цитоплазматической мембраны. Затем ДНК денатурируется. У пневмококков, как полагают, денатурация происходит уже на стадии проникновения через цитоплазматическую мембрану.
Внешне денатурация трансформирующей ДНК проявляется в «исчезновении» большей части ДНК донора, если следить за ней только по способности гомогенатов клеток, поглотивших ДНК, трансформировать другие компетентные клетки. Так, уже через минуту после контакта диплококков с ДНК в них можно обнаружить лишь около Vs исходной трансформирующей активности. Это хорошо согласуется с относительно низкой трансформирующей активностью денатурированной ДНК.
Из двух нитей денатурировавшей ДНК донора в хромосому реципиента включается только одна из них. Другая расщепляется нуклеазами цитоплазмы. Замещение в ДНК реципиента только одной цепи, да и то на ограниченном участке, демонстрируется экспериментом Fox и Allen (1964). Вводя в ДНК донора «тяжелые» предшественники, содержащие N15 и одновременно Рзг, они наблюдали при градиентном центрифугировании ДНК клетки,
претерпевшей трансформацию, следующее. Если ДНК выделяется из трансформанта щадящим методом, т. е. в наиболее высокополимерном состоянии, то невозможно разделить ее в градиенте плотности (рис. 36). Если же она обрабатывается ультразвуком, то выявляется ДНК, промежуточная по плотности по сравнению с «легкой» и контрольной «тяжелой» ДНК (рис. 36,б).Это понятно, ибо в ДНК реципиента включаются преимущественно фрагменты ДНК донора с молекулярным весом до 1—2• 10е, а недеградированные препараты ДНК реципиента имеют молекулярный вес порядка 10*10® и поэтому лишь незначительно отличаются по плотности от исходных. Ультразвуковое же дробление до размеров порядка нескольких сотен тысяч позволяет отделить эти гибридные фрагменты.
Однако и эти фрагменты содержат лишь одну тяжелую цепь и оказываются промежуточными по плотности. Если теперь к ультразвуковой обработке добавить тепловую
С
s
Рис. 36. Градиентное центрифугирование ДНК трансформированного D. pneumoniae. ДНК донора получена при выращивании на среде с N15 и Р32.
а —ДНК выделена щадящим методом; б —ДНК обработана ультразвуком; в — ДНК обработана ультразвуком и денатурирована нагреванием (по Fox, Allen, 1964, схематизировано).
Плотность тяжелой Плотность легкой ДНК ДНК
¦ 1 »¦¦¦¦—>! -I-H ¦ "Ml ¦'
Направление возрастания плотности
денатурацию, то появится пик с плотностью, соответствующей чистой тяжелой ДНК (рис. 36, в), в результате расхождения цепей мелких гибридных молекул.
Нить ДНК донора взаимодействует с комплементарной областью одной из нитей ДНК реципиента. Имеется в виду компле-ментарность лишь большей части цепей, но не на всем их протяжении, так как участок, определяющий генетические различия донора и реципиента, не может быть одинаковым. На рис. 37 он обозначен как участок Д. Эта стадия трансформации невозможна, если не допустить локальной денатурации ДНК реципиента. Такая временная денатурация является, как известно, условием целого ряда проявлений функциональной активности ДНК, уже рассматривавшихся ранее, и не должна поэтому вызывать удивления. Образовавшаяся после присоединения ДНК донора область ДНК реципиента состоит из трех цепей, две из которых большей частью спирализованы, а одна нет. Она становится объектом действия систем, исправляющих дефекты ДНК. Происходит удаление эндонуклеазами участка одиночной цепи донора. Далее возможны два
основных этапа/, Первый состоит в репликативном синтезе недостающих цепочек и сшивании концов лигазами. На этом процесс может закончиться. После очередного деления клетки возникнут особи как трансформированные, так и неотличимые от реципиента. Второй этап состоит в дальнейшем действии «вырезающих» эндонуклеаз на зону Д, где сошлись некомплементарные участки ДНК
/ ДНК реципиента
:пшп 11 ит\ i m 11 п m гтптпптп гтптгт
ДНК донора
шшпшпшш
| Нуклеазы репарации
^—ч________
ТТТТП_____-ТПП,
Деградация одной из цепей '
У
| Полимераза,лигаза Участок Д- _
I ui 1 п 11 п ттт^^Г—I г гм I плиц I ?:
Дальнейшее действие нуклеаз репарации ^
J
U111 М 11111III
Путь а
___* II11 П1111111111J
I
Полимераза, лигаза
Этап IN
in 11 м I гтттщ I hi nmrmi rniiii in
Трансформация ликвидирована
IIMIIIinri'ITir
Молекулярная
гетерозигота
Предыдущая << 1 .. 94 95 96 97 98 99 < 100 > 101 102 103 104 105 106 .. 164 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed