Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Артюхов В.Г. -> "Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами" -> 97

Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами - Артюхов В.Г.

Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами — Воронеж, 2000. — 296 c.
ISBN 5-7455-1162-1
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani2000.pdf
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 113 >> Следующая

* Раздел написан С. Г. Резваном.
стромой форме в виде гемолипостроматинового комплекса (соединение гемоглобина с липидами и холестерином). Реализация процесса освобождения связанной фракции происходит в стадии химического гемоглобинолиза, осуществляющейся под действием поверхностно-активных веществ (сапонин, дигитонин и др.). При этом наблюдается выход связанного гемоглобина вследствие распада гемолипостроматинового комплекса.
Все вышеперечисленные стадии протекают без нарушения морфологической целостности эритроцита. Стадия строматопо-роза, характеризующаяся проводимостью эритроцитами электрического тока при сохранении морфологической целостности клетки, наступает при действии на эритроциты концентрированных растворов сапонина.
Полная дезинтеграция структуры клетки (строматолиз) происходит под влиянием холево-, дезоксихолево- и олеиновокислого натрия.
Принцип метода регистрации осмотических и кислотных эритрограмм заключается в фотометрической регистрации кинетики распада эритроцитов под действием гемолитика в определенной дозе. Мерой стойкости эритроцитов является время, в течение которого происходит их разрушение. Многостадийный процесс вовлечения эритроцитов в гемолиз позволяет построить эритрограмму — зависимость их распределения по стойкости во времени.
Лабораторная работа № 13
Автоматический метод регистрации осмотических и кислотных эритрограмм
Установка для регистрации эритрограмм, разработанная С. Г. Резваном на кафедре биофизики и биотехнологии Воронежского государственного университета, позволяет измерять степень повреждения мембран эритроцитов по действием различных химических агентов. Оптический блок установки состоит из фотоэлектрического колориметра ФЭК-56 М со встроенным дифференциальным усилителем. Регистрационный блок представлен двухкоординатным регистратором ЛКД 4-003, цифровым вольтметром В7-20. Для термостатирования суспензии эритроцитов применяют ультратермостат XJTU-6 и термостатируемые кюветы. Электрическая схема предварительного усилителя позволяет получить линейную зависимость между истинным коэффи-
циентом светопропускания (Т) и выходным сигналом установки.
Гемолиз эритроцитов проводят в кюветах с наружными размерами 20x40x10 мм и рабочим объемом 4 мл. Точность хода луча ФЭКа составляет 0,01 мм. Для увеличения точности хода лучей ограничивают диаметр центрального окна кюветы до 0,8 см. Чувствительность ФЭКа при этом уменьшается, но результаты становятся более стабильными за счет уменьшения вклада светорассеяния. Измерение светопропускания проводят при длине волны 490 нм, так как в данном случае коэффициент молярной экстинкции оксигемоглобина минимален. Следовательно, при использовании этого метода регистрации тестируется не сам гемолиз (выход гемоглобина в среду инкубирования), а повреждение мембран эритроцитов: светорассеяние исследуемых образцов изменяется за счет разрушения мембраны, в том числе ее цитоскелета. Выход гемоглобина — явление вторичное и при длине волны 490 нм практически не влияет на регистрируемый сигнал.
При проведении гемолиза эритроцитов в одной кювете установка регистрирует S-образную интегральную кривую, форма которой отражает суммарное изменение величины светорассеяния (т) в исследуемом растворе во времени, т. е. т — f(t) — рис. 61. В процессе гемолиза скорость распада эритроцитов достигает максимального значения примерно в середине кривой. При дифференцировании сигнала интегральной кривой, т.е. зависимости dT/dt, в области максимальной скорости гемолиза эритроцитов
G, %
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
-10
g эритроцитов t, мин
Рис. 61. Интегральная кривая осмотического (кислотного) гемолиза эритроцитов: 1 — фаза сферуляции; 2 — максимальная скорость гемолиза (vmax); 3 — время 50 % гемолиза (t50); 4 — конечная фаза гемолиза. По оси абсцисс — время гемолиза; по оси ординат — степень гемолиза
появляется глобальный максимум. Кинетический метод регистрации процесса разрушения эритроцитов позволяет оценивать следующие параметры:
tjmT - время латентного периода гемолиза, с;
tG - собственное время гемолиза;
t50 - время половинного гемолиза, с;
vmax “ максимальная скорость гемолиза, отн. ед.;
Gsf, G - степень сферуляции и гемолиза эритроцитов, %. Латентный период (t ) отражает время, прошедшее с момента введения гемолитика в кювету до первого появления гемоглобина вне эритроцита (участок “0—1”на рис. 61). Смещение интегральной кривой вниз от нулевой линии вызвано повышением интенсивности рассеяния света суспензией эритроцитов в результате их сферуляции. Истинный гемолиз, отраженный в виде S-кривой, представляет собой процесс последовательного вовлечения всей массы эритроцитов (участок “1—4”); в первое время происходит разрушение самых старых эритроцитов, являющихся наименее стойкими (участок “1—2”). Появление изгиба на интегральной кривой перед выходом на плато (участок “3—4”) характеризует кинетику разрушения молодых, наиболее стойких эритроцитов. Плато на кривой (точка “4”) означает, что гемолиз окончен, т.е. все эритроциты гемолизированы.
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed