Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Артюхов В.Г. -> "Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами" -> 74

Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами - Артюхов В.Г.

Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами — Воронеж, 2000. — 296 c.
ISBN 5-7455-1162-1
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani2000.pdf
Предыдущая << 1 .. 68 69 70 71 72 73 < 74 > 75 76 77 78 79 80 .. 113 >> Следующая

С целью детализации представлений, касающихся выяснения механизма защитного действия серотонина по отношению к молекулам ЛДГ, при помощи метода ИК-спектрофотометрии были исследованы особенности вторичной структуры изофермента М4 из скелетных мышц свиньи в нативном состоянии и в присутствии биогенного амина.
Анализ соотношения интенсивностей поглощения в полосах амид I и амид II на частотах, являющихся характеристическими для отдельных элементов вторичной структуры, свидетельствует
о том, что присутствие биогенного амина индуцирует увеличение доли беспорядочной структуры в молекуле фермента (табл. 15). При этом отмечаемый прирост ее реализуется за счет как ос-спи-ральных участков, так и р-складчатых слоев. В случае соотношения молекул ЛДГ и экзогенного модификатора 1:1 наблюдаемый эффект в большей степени обусловлен участием а-спиралей, входящих в состав белка.
Таблица 15
Соотношение полос поглощения, характеризующих основные типы вторичной структуры белковой молекулы, для лактатдегидрогеназы в свободном состоянии и в присутствии серотонина
Соотношение Исследуемые образцы
Нативный белок ЛДГ + серотонин ЛДГ + серотонин
в соотношении в соотношении
молекул 1:1 молекул 1:10
1666 (беспорядочная 1,423 ±0,092 1,406 ± 0,021 1,596 ± 0,107
структура):
1650 (а-спираль) см-1
1535 (беспорядочная 1,488 ±0,092 2,297 ± 0,078* 1,658 ± 0,109
структура): 1516
(а-спираль) см'1
1685 ф-складки): 0,926 ± 0,007 0,932 ± 0,028 0,752 ± 0,040*
1666 (беспорядочная
структура) см-1
1550 ф-складки): 1535 1,342 ± 0,058 1,072 ± 0,029* 1,160 ± 0,033*
(беспорядочная
структура) см"1
1650 (а-спираль): 0,746 ± 0,050 0,756 ± 0,029 0,754 ±0,046
1685 ф-складки) см-1
1516 (а-спираль): 0,538 ±0,029 0,407 ± 0,009* 0,535 ±0,019
1550 ф-складки) см-1
* Отличие от контроля статистически достоверно. 13. Заказ 3788
Изменение спектральных характеристик фермента удается обнаружить и на других участках спектра. При соотношении молекул ЛДГ и серотонина 1:1 статистически достоверно уменьшается интенсивность поглощения образцов на частотах 1468, 1420 см-1 по сравнению с нативным белком; отмечается появление нового максимума на частоте 1502 см-1.
Повышение концентрации экзогенного модификатора в 10 раз сопровождается снижением интенсивности поглощения на частоте 1432 см-1. Вместе с тем в области 1440—1380 см-1 регистрируется выраженный пик с максимумом при 1404 см-1. Для нативного белка поглощение в этом участке незначительно, а при соотношении компонентов изучаемой системы 1:1 практически отсутствует. ИК-спектр свободного фермента характеризуется наличием широкой полосы поглощения в области 1370—1180 см-1. Добавление к его раствору серотонина приводит к ее сглаживанию и при соотношении молекул ЛДГ — биогенный амин 1:10 в данном диапазоне отмечается практически монотонное убывание светопропускания образца.
Таким образом, выявлен выраженный фотопротекторный эффект серотонина по отношению к молекулам изоферментов Н4, Н3М, Н2М2 ЛДГ эритроцитов человека, обусловленный образованием комплекса ЛДГ — серотонин, формирование которого затрагивает вторичную структуру белка. Возможно, комплексиро-вание биогенного амина с молекулами фермента происходит и в растворе. Однако полученные результаты не исключают и вероятность дезактивации серотонином АФК, в том числе
Динамический комплекс с молекулами ЛДГ способен образовывать и его кофактор NADH, что может существенно изменять фоточувствительность фермента. С целью расширения представлений, касающихся выявления механизма УФ-модификаций ЛДГ в присутствии кофермента, были проведены эксперименты по изучению фотостабильности молекул ЛДГ (М4) из скелетных мышц свиньи в условиях различной занятости ее активных центров этим кофактором. Степень занятости активных центров фермента NADH рассчитывали по формуле (Ч. Кантор, П. Шиммел, 1985):
[NAD.H]
~ Kdis +[NADH]’ где Y — степень насыщения белка лигандом; [NADH] — концентрация кофактора; Kdis — константа диссоциации комплекса бе-
лок — лиганд (в качестве Kdjg использовали значение константы Михаэлиса 2,5-10~б моль/л для NADH по отношению к изоформе М4) (С. Е. Северин, Г. А. Соловьева, 1989) .
Установлено, что предварительное добавление NADH (4-10'8 моль/л) к ЛДГ (10~8 моль/л), УФ-облучаемой в дозе 3,02 кДж/м2, не вызывает статистически достоверных изменений степени инактивации свободного белка (32 %). Y в данном случае — 0,16 %. При концентрации NADH 4-10'7 моль/л (Y = 1,57 %) обнаруживается эффект сенсибилизации (13 %). Фотомодификация ЛДГ в присутствии кофермента в концентрациях 4*10-8 (Y = 13,8 %) и 2,5-10~5 моль/л (Y=50 %) приводит к регистрации протекторного эффекта NADH по отношению к ферменту: степень УФ-инактивации белка в этом случае соответственно на 9,3 и 16,0 % ниже уровня активности ЛДГ, облученной без кофактора.
Предыдущая << 1 .. 68 69 70 71 72 73 < 74 > 75 76 77 78 79 80 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed