Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 69. Расположение децен-трированной диафрагмы вблизи от оптической оси (слабый эффект).
Рис. 70. Установка децен-трированной диафрагмы при переходе освещения от светлого поля к темному (рельефное освещение).
Чем больше открыта децентрированная диафрагма, тем более похожим становится косое освещение на обычное, достигаемое при помощи вертикально падающих лучей. Величина диаметра децентрированной диафрагмы предлагается от 7г до х/3 диаметра отверстия применяющегося объектива. При дальнейшем увеличении децентрированности наружный край отверстия диафрагмы может совпадать с наружным краем всего отверстия диафрагмы, отвечающего случаю равенства АК и апертуры объектива при вертикальном освещении и использовании тех же объективов. Это можно пояснить следующим примером : диаметр ирисовой диафрагмы конденсора был определен в 17,9 мм; величина и положение децентрированной диафрагмы даны на рис. 68.
Если приблизить децентрированную диафрагму к оптической оси, эффект косого освещения становится слабее. Этого следует решительно избегать. Если же отверстие децентрированной диафрагмы заходит за край диафрагмы, диаметр которой равнялся в приведенном выше примере 17,9 мм, то между светлым и темным полем возникает переходное освещение. Этот свет вызывает очень запутанные явления преломления и дифракции. Однако благодаря эффекту контраста в препарате особенно хорошо просматриваются от-
Рис. 71. Bacterium vulgare: а — в темном поле; б — при рельефном освещении 800: 1. Снимок Э. Шильд (Ewald Schild, Prakt. Mikr.
u. d. Arzt. Vergl. d. Wien. med. Wochenschrift, 1943).
При рельефном освещении бактерии приобретают объемность.
дельные детали. Этот способ освещения называют также рельефным освещением. Объекты кажутся в высшей степени пластичными, а при бинокулярном наблюдении достигается большая стереоскоиичность (см. рис. 71). Препараты должны быть неокрашенными и заключенными в воду или в воздух. Целесообразно употреблять сухие объективы с большим увеличением и А — 0,60 и выше. Поскольку при работе с ахроматическими объективами отчетливо виден вторичный спектр, который в некоторых случаях мешает наблюдению, предпочтительнее применять апохроматы. Диафрагма конденсора, в нарушение принципа Келера, должна быть полностью открыта с тем, чтобы, как и при работе по методу темного поля (см. главу 6), на объект падали бы и лучи, идущие из-за границы апертурного кольца (см. рис. 105).
Если отверстие децентрированной диафрагмы будет находиться за пределами границ апертурного кольца (см. приведенный выше пример), возникнет одностороннее освещение по методу темного поля. Об этом будет идти речь в разделе 6.2 главы 6.
При одностороннем косом освещении возникают опти-ческйе искажения. Для того чтобы их распознать, нужно направлять свет попеременно с разных сторон, т. е. устанавливать диафрагму следующим образом (см. рис. 73, а—г).
Рис. 72. Положение ieusH трированной диафрагмы лри освещении по методу темного поля.
Рис. 74. Микрофотографии тест-диатомеи Pleurosigma angulatum. Диатомовая водоросль освещалась односторонним косым светом, который каждый раз направлялся перпендикулярно к одной из трех систем полос структуры. В каждом случае выявляется только одна система.
Рис. 75. Азимут освещения в 90°, получаемый благодаря децентрированно выполненному отверстию диафрагмы.
а — диафрагма, обусловливающая этот азим\гт.
Рис. 76. Азимут освещения в 180°, получаемый благодаря азимутной диафрагме.
Рис. 77. Азимут освещения в 360°, получаемый благодаря центральной диафрагме —- заслонке.
Для этой цели можно, как было сказано выше, вращать децентрированную диафрагму большого осветителя Аббе. Если применяют децентрированные диафрагмы в держателе фильтра, то их также вращают. При этом способе используется всегда определенный сектор 360° круга апертуры конденсора. Такой сектор называется азимутом освещения. Известные нам до настоящего времени децентри-рованные диафрагмы имели соответственно азимут 90°.
Однако децентрированные диафрагмы необязательно должны быть круглыми. Часто их изготовляют в форме полумесяца или сектора. Азимут освещения составляет тогда почти 180°.
Подобные диафрагмы называются азимутными диафрагмами. Их преимущество основано на большом азимуте освещения, благодаря чему уменьшаются возможности оптических искажений, хотя снижается также и контрастность.
Можно пойти еще дальше и направить косые лучи со всех сторон (азимут 360°). Это достигается с помощью центральных диафрагм-заслонок (сравни также раздел 5.3 главы
5, возникновение рельефных изображений).
При рассмотрении небольших линейных образований важно, чтобы при косом освещении лучи падали бы перпендикулярно к продольной оси этих образований, так как в противном случае неизбежны грубые оптические искажения.
Какие же технические возможности существуют для достижения хорошего освещения по методу светлого поля при проходящем свете?
1. У простых микроскопов без конденсоров мы вынуждены обходиться одним лишь зеркалом, отражающим свет в направлении оптической оси. Для достижения этого служит специальное подвесное устройство (карданное подвесное устройство), с помощью которого зеркало может вращаться во все стороны. Передняя сторона его плоская, задняя — вогнутая (в о г-нутое зеркало).
