Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
2. Далее, выявление у панцирей диатомовых водорослей тончайших структур зависит не только от апертуры объектива и обусловливаемого ею разрешения, но также и от контраста водоросли по отношению к .среде, в которую она заключена.
Средами для заключения диатомовых водорослей могут служить:
Воздух с показателем преломления — 1,00
Стиракс с показателем преломления — 1,58
Хиракс с показателем преломления — 1,70
Сиракс с показателем преломления — 1,80
Реальгар с показателем преломления — 2,40
Панцирь диатомей имеет показатель преломления 1,41. Чем больше разница между показателем преломления диатомей и среды, в которую они заключены, тем лучше контраст.
3. Разрешение зависит от освещения. Если свет падает под углом, то разрешение повышается.
3.2. ИССЛЕДОВАНИЕ СФЕРИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ
Объективы могут быть сферически недоисправлены или переисправлены. В обоих случаях получается вуалированное изображение.
Специалисты-оптики проверяют этот дефект при помощи пробной пластинки Аббе, в которой нижняя сторона покровного стекла покрыта тонким слоем серебра с нанесенными на нем тонкими параллельными линиями. Покровное стекло должно быть длинным и узким и обладать различной толщиной (приблизительно от 0,10 до 0,20 мм). Это делает также возможным измерение толщины покровного стекла, на которую скорригирован объектив.
Проверка объектива производится путем определения резкости линий в центре поля зрения, причем один раз при прямо падающем свете, а другой раз — при свете, падающем под углом справа к исследуемым линиям. Если линии окружены расплывчатой каймой, или их контуры представляются нерезкими, либо если при прямом и косом освещении получаются изображения неодинаковой резкости, то значит, что сферическая коррекция неудовлетворительна.
Если в распоряжении экспериментатора нет пробной пластинки, то можно воспользоваться мазком крови.
В случае переисправленности верхний край кровяного шарика (эритроцита) выглядит вуалированным (если рассматривать кровяной шарик как циферблат, то это место будет около цифры 12). В случае недоисправленности'вуалированным будет нижний край шарика (около цифры 6). Это можно исправить при помощи выдвижной трубки тубуса. При ‘сферической переисправленности ее вдвигают, при недоисправленности — вытягивают.
3.3. ИССЛЕДОВАНИЕ ХРОМАТИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ
Это исследование также можно проводить с помощью пробной пластинки на любом объекте, обладающем тонкими параллельными линиями, как, например, Surirella gemma. Свет, применяющийся для освещения, должен падать снизу, но под прямым углом к параллельным линиям.
Апохроматы могут давать в центре поля зрения лишь совсем узкую, еле заметную цветную кайму вокруг тонких параллельных линий. Цветное окаймление при применении ахроматов бывает различным в зависимости от способов коррекции, но большей частью с одной стороны линии наблюдается желто-зеленый цвет, а с другой стороны — пурпурный, фиолетовый или розовый. При недостаточной хроматической коррекции появляются другие цвета, например красный или синий.
3.4. ИЗМЕРЕНИЕ ФОКУСНОГО РАССТОЯНИЯ
Увеличение объектива и окуляра зависит от их фокусного расстояния, определение которого связано со сложными расчетами и является делом оптических фирм.
В проспектах, прилагаемых к выпускаемым микроскопам, фокусные расстояния, как правило, бывают указаны. Однако приводимые в таблицах величины фокусных расстояний для объективов часто не совсем соответствуют действительным, так как не всегда может быть изготовлен объектив соответственно его расчету.
При работе с объективом микроскопа важно дополнительно определить его фокусное расстояние. Ниже приводится метод определения, достаточно точный для практической работы.
Сначала определяют увеличение микроскопа одним из способов, описанных в разделе 5.3 главы 5. Затем выдвигают тубус на t мм. Если нет выдвижной трубки, то из тубуса выдвигают на t мм окуляр, который закрепляют в этом положении. Теперь снова измеряют увеличение. Фокусное расстояние объектива вычисляется тогда по следующей формуле: f
/= —
где — / — фокусное расстояние объектива,
t — расстояние, на которое выдвинут тубус (в миллиметрах),
Bi — увеличение при выдвинутом тубусе или окуляре, В2 — увеличение при нормальном положении тубуса или окуляра.
Измерение лучше всего производить ортоскопическим измерительным окуляром с окуляр-микрометром 5 : 50 или 10 : 100. Если объектом служит объект-микрометр, в котором 1 мм разделен на 100 частей, то увеличение может быть определено непосредственно по шкале.
3.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ УВЕЛИЧЕНИЯ МИКРОСКОПА
Как уже было сказано в разделе 2.3 главы 2, общее увеличение микроскопа определяется путем перемножения масштаба изображения объектива и лупного увеличения окуляра.
Определение увеличения производится следующим образом: при номинальной длине тубуса (стандартной для
