Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 79

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 73 74 75 76 77 78 < 79 > 80 81 82 83 84 85 .. 278 >> Следующая

Плазмин и др.
и др.
Субстрат
Фермент
Метод
Чувствительность, нг
Литера-
турный
источ-
ник
HPhe-PheTOH
Лейцинаминопеп-
тидаза
10-300
[1707]
Сокращения: тв - твердофазный метод; Phe^ - П-нитрофенилаланин;
ОМС - 7-окси-4-метилкумарил; АМС - 7-амино-4-метил-кумарил; MCL - 7-амино-4-метилгинолошгп-АА - 2-аминоакридонил; Ant - антроноил-(0-амино-бензоил); p-NA - П-нитроанилид; SBzl - тиобензиловый ефир; Phe^ - З-тиафенилфенилаланин;
Ф - флуоресцентный; Р - измерение радиоактивности;
X - хроматографический; фр - ферментативный;
Сп - спектрофотометрический; S - определение SH-группы.
*Основан на внутримолекулярном тушении флуоресценции в субстрате.
4.1.3. Снысл и значение кинетических констант
Из экспериментов по стационарной кинетике реакции гидролиза субстратов и значений молярной концентрации активных центров фермента можно получить кинетические константы k . и К’, а также их отношение.
cat гп
Лишь в простейшем случае кинетической схемы (2) смысл величин ?oat и iT является однозначным - fecat равна й2, т.е. константе скорости первого порядка превращения фермент-субстратного комплекса в продукты реакции, a iT равна Кв - константе диссоциации фермент-субстратного комплекса, причем последнее справедливо лишь при условии &_.,»&2
Значительно сложнее обстоит дело, если на пути от субстрата к продуктам образуется несколько фермент-субстратных комплексов. Так, для схемы (5) значения кинетических параметров будут:
й . = ------ = ----------. (2°)
1+Кр й2+й_2+й3
кш (К,+ь3){ь_г+ь3)
К' = ----- = ------------------, (21 )
Ш ^+KF ft1 (fc,+ft_2+ft3)
fecat ft1fe2ft3
---- = ----- = ------------------. (22)
К Km (K^3)^k3)
Таким образом, ни одна из экспериментально определяемых констант в общем случае не отражает ни прочности фермент-субстратных комплексов, ни скорости их превращений.
В зависимости от соотношения величин констант скоростей индивидуальных стадий экспериментально определяемые кинетические параметры могут принимать значения, приведенные в табл.34 (при условии к
Для схемы (7) имеем:
ЬгЬ3 к3 fecat
ft . = ---------, К* --------------------------и --------------- = ---------.
cat ft_+ft„ m ft. ft_+ft„ K’ ft ,+ft,
cio 123 m — 12
Таблица 34. Значения наблюдаемых кинетических параметров при различном соотношении констант скоростей индивидуальных стадий для кинетической схемы (5) [1715]
Вариант h со cat Kf ft JK'
m cat m
1 «1 «ft_g ft3ft2/ft_2 К ft3ft2/Asft_2
s
2 «1 0J fe-2 К fe-2/?s
! s
а;
3 »1 CVJ , & Asft_2/ft2 fe3W-2
I CO
АЗ
4 »1 »ft_2 CO V*s
Если наиболее медленной стадией является образование комплекса ЕА, т.е. ft ,»ft_ и ft »ft„, то ft =ft и й '=ft ./ft =й , если же лимитирующей стадией яв-
— 1 с о с CfiiX с ГП I 1 Q
ляется распад ЕА, т.е. ft >>ft„, но ft «ft„, то ft =ft_, а Й’=K ft„/ft„. Незави-
— 1 2 3 2 cat о ms 3 2
симо от лимитирующей стадии отношение Ъ /Rj=t^/Кв.
Приведенные соображения показывают, что наблюдаемые на опыте константы могут в зависимости от лимитирующей скорость всего процесса стадии отражать различные типы фермент-субстратного взаимодействия. По мнению 'Клиланда [17161, очень часто скорость ферментативного процесса лимитируется или скоростью изомеризации промежуточных комплексов, или скоростью диссоциации продуктов.
4.1.4. Непродуктивное связывание
Субстрат может связываться с ферментом таким образом, что образовавшийся комплекс окажется неактивным, т.е. неспособным превращаться в продукты ое-акции. Такой комплекс называют [1717,1718] непродуктивным, и его образование наряду с продуктивным комплексом приводит к изменению наблюдаемых кинетических параметров гидролиза. Действительно, для кинетической схемы
К ft2
Е + S =«—- ES ---------> Е + Р (23)
К'
з
ES'
уравнение скорости образования продукта будет:
k ЕЕ] [S3
2. о о
К +(1+Я /Я') [S]
S 8 8 С
Предыдущая << 1 .. 73 74 75 76 77 78 < 79 > 80 81 82 83 84 85 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed