Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 144

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 278 >> Следующая

С1б ком
племента
Карбокси- HGlyPheOH 25(8) 3250 100 [2989]
пептида- HGlyTyrOH 25(8) 4030 271 [2989]
за А HGlylleOH 25(8) 1970 895 [2989]
(арса- HPheOH 25(8) 1156 1746 [2989]
нилазо-
Туг248)
Термоли P-LeuTrpOH - 900 2,5 10~3 [2990]
зин Талопептин ' 70 6,3.10_Л [2990,
2991 ]
‘Сокращения см. табл.67 а также: STI - ингибитор трипсина из
стрептомицетов; Mns - мансил; Р - (0Н)2Р(= 0)-.
**См., однако: [2515]. i « 1... ........
- -< ......
Во всяком случае, первый этап взаимодействия - это неполная "подстройка" фермента и тиганда. Для истинных субстратов амидгидролаз, очевидно, конечный комплекс (ЕЬ* или ES*) должен быть продуктивным фермент-субстратным комплексом. Первый же комплекс может быть результатом "заякориванш7" субстрата ферментом по участку наибольшей специфичности, например участку первичной специфичности. Тогда можно себе представить, что вторая стадия заключается в реализации вторичных взаимодействий (вторичной специфичности) и она может сопровождаться конформационными перестройками, вызывающими изменение структуры фермент-субстратного комплекса. Следствия таких представлений для понимания специфичности и эффективности катализа амидгидролазами будут изпожеш-' в разд.8.9.
6.3. Термодинамика
Стабильность фермент-субстратного комплекса определяется изменением свободной энергии комплексообразования
hG = - RTlriK ,
о в*
где К0=1 /К0. константа ассоциации фермента и лиганда:
Кв [EHS1
Е + S ------* ES, К = ---------------.
s [ESI
Как уже отмечалось, определяемые в кинетическом эксперименте константы Михаэлиса во многих случаях не тождественны константам диссоциации фермент-субстратных комплексов. Последние можно ошеделить независимым способом, например методами равновесного диализа, гель-фильтрации, по изменению спектральных характеристик ферментё или субстрата при их взаимсдействии [16611. Во всех случаях необходимо выбирать условия, когда химическое превращение субстрата не происходит.
Если, как это показано в пре, ндущнем разделе, взаимодействие фермента и субстрата происходит ступенчато, то определяемая константа ассоциации (К^) может быть эффективной величиной. В условиях [Elo«[Slo для схемы
Кв К*
Е + S - S - ES S ~ ES*
эта величина будет:
Кв 4 [ES* ]
К' = ------, где К = -------.
в 1+К* ¦ в [ES]
В
В том случае, когда равновесие сильно смещено в сторону ES* (К*»1) К’=К /К*, если же равновесие смещено в сторону комплекса ES (К*«1), то
к'=кв.
В В
Таким обраас5м, наблюдаемое изменение свободной энергии может в зависимости от положения равновесия отражать или полное изменение в системе, приводящее к образованию комплекса ES*, или же только частичное изменение, связанное с образованием комплекса ES.
В связи со сказанным интересно рассмотреть ситуацию со связыванием субстратов пепсина. Для этого фермента не обнаружено каких-либо кинетически значимых стадий между комплексом Михаэлиса и стадией химического превращения [1749, 30041, т.е. величина iT =iT. Многие субстраты этого фермента имеют практически одинаковые значения -1СГ3 М при значительном различии в величинах feoat (см. табл.39), т.е. несмотря на значительные различия в структуре наблюдаемая стабильность их комплексов с ферментом практически одинакова. Данные по температурной зависимости iT [19071 показывают, что наблюдается небольшое систематическое увеличение энтальпии ассоциации и компенсирующее положительное изменение энтропии при переходе от "медленных" субстратов к "быстрым". В целом связывание субстратов определяется значительным положительным изменением энтропии, что можно трактовать 113751 как следствие процесса десольватации.
Эти данные хорошо оогяасуюто* J представлением о стадийности комЛзчгсо-
образования в условиях, когда К*<1. Поскольку все исследованные субстраты имеют одну и ту же группу в участке первичной специфичности [Phe(N02) или Phel, напрашивается вывод о том, что в комплексе ES реализуются взаимодействия в основном только этого фрагмента субстрата с ферментом. Тогда остальные, вторичные, взаимодействия должны реализоваться в продуктивном комплексе (ES*), который быстро превращается в продукты реакции. Различия в скорости превращения и будут мерой вторичных взаимодействий. В разд.8.8 мы вернемся к анализу такого "запасания" свободной энергии для понижения активационного барьера химической стадии реакции, здесь же проанализируем вклад вторичных взаимодействий в катализ на примере двух соединений [18781:
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed