Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 130

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 124 125 126 127 128 129 < 130 > 131 132 133 134 135 136 .. 278 >> Следующая

R—С ,Н СООС=ССН .
о Л. 3
В качестве специфического необратимого ингибитора (З-лактамазы предложен [26741 фенилпропиналь, реагирующий с остатками аргинина и лизина:
Цистеиновые амидгидролазы.. Кроме хлорметилкетонов, производных аминокислот и пептидов, с SH-группой многих цистеиновых амидгидролаз реагируют диа-
Ш
2
зомстшпсетоны типа [2675-2677]:
С,Нс CH„0C0NHCHC0CH-N-N.
О Ь d. 1
В отличие от хлоркетонов, скорость реакции которых с SH-группой увеличивается с увеличением pH, диазометилкетоны наиболее эффективно реагируют при низких значениях pH. Отсюда был сделан вывод [26751, что эти реагенты атакуют незаряженную сульфгидрильную группу. Однако затем было показано [26783, что наблюдаемая pH-зависимость реакции может быть объяснена лимитирующим скорость протонированием промежуточного тиогемиацеталя (VIII) с последующей трехцентровой перегруппировкой:
° ° Г' ?
R-Й—CH=N=N R—A—CH=N=N R—С— СН N=N R-d-CH,
I Y 2 1
ImH+
I
ImH+
+ n2
lm
VIII
Реакция диазометилкетонов с цистеиновыми амидгидролазами происходит по схеме (34) (см. разд. 5.9.1) весьма эффективно. Так, константа скорости второго порядка реакции катепсина В с ZPheAlaCHN2 &t/Kt=7,5.104 М-1мин-1 [2679], а с ZPheTrpCHN2 - 8,5.106 !Г1мин~1 [2680]. Эти соединения не реагируют с низкомолекулярными тиолами.
К группоспецифическим ингибиторам тиоловых протеаз можно отнести 1,3-дибромацетон, реагирующий одновременно с SH-группой и остатком гистидина активного центра [ 2681]:
— S
Вг
\
СН,
с = о •
сн2
/
Вг
— S-
- сн,’ сн
:!)
\
С = 0
Известен и ряд других специфических необратимых ингибиторов цистеиновых протеаз 12682-2684]. Среди них особой эффективностью обладает соединение (IX), реагирующее с катепсином В с константой скорости fe /й.=2,6.106 М_1с~1 12682]:
ZPheSer(OBen)CHgOCO-^Q) .
IX
Рзс
Аспаргшшние сиш^идролазы. В 1965 г. было обнаружено [1340], что дифе-нилдиазометан этерифицирует 2-3 карбоксильные группы пепсина с частичной потерей каталитической активности фермента. Поиск более специфических ди-
азосоединений привел к получению большого числа реагентов, специфически ингибирующие аспартатные протеазы путем реакции с каталитически важной карбоксильной группой (Asp215 у пепсина) И341-1343,2685-2688]. Наиболее известным из них является метиловый эфир диазоацетилнорлейцина:
N—N—CHCONHCHCOOCIL.
I
(СН2)3СН3
Соединения этого типа реагируют с протеазами в присутствии ионов Си2+. Механизм реакции, по-видимому, заключается в образовании сначала комплекса карбена с ионом меди [1343,26891:
0 0 + +
II
-С-сш2 + cuci2-* RCCH-CU ¦Cli +
Поскольку карбеновый комплекс несет положительный заряд, вероятно, он связывается с ионизированной карбоксильной группой. Исследования рН-зависи-мости инактивации [1342,13431 указывает на участие протонировашюй группы с рйа»5. Таким образом, реакция идет, по-видимомус протонировашюй СООН-группой остатка Asp215 при участки соседней ионизированной карбоксильной ¦"руппы. Ни денатурированный пепсин, ни пепсиногены не реагируют с диазосоединениями [1341,26851. Диазосоединения были использованы для введения ЭПР-метки в активный центр аспартатных протеаз [26901.
Другими группоспецифическими реагентами для аспартатных протеаз являются эпоксиды типа 1,2-эпокси-3-(п-нитрофенокси)-пропана [26911:
В кислой среде эпоксиды реагируют с карбоксилатными гругпам* [26921. Было показано [26931, что этот реагент образует сложноэфирную связь с остатком Asp32 в пепсине. Кроме того, в определенных условиях затрагивается группа Asp215 и остаток Met180.
Рентгеноструктурные исследования пенициллопепсина, ингибированного эпоксисоединениями, показали [13451, что карбоксилат-ион Asp32 атакует атом С-1 эпоксида, тогда как реакция с Asp215 идет по атому С-2.
Металлсодержащие ажидгидролазы. Для этой группы ферментов наиболее специфическими реагентами ивляются хелатирующие вещества (этилендиаминтетраук-сусная кислота, 1.Ю-фепантролин^ евнзыъающио ион металла (см. разд. 5.9.2). Кроме того, весьма специфически реагируют обратимые ингибиторы, описанные в разд.5.9.3. Группоспецифические необратимые ингибиторы для этих ферментов в настоящее время отсутствуют. Имеются лишь сообщения- о действии некоторых ингибиторов на отдельных представителей металлсодержащих амидгидролаз. Так, описано [26941 действие хлорацетилг^гцюксамата метилового эфира лейцина и соответствующего читриле на термолизин:
Предыдущая << 1 .. 124 125 126 127 128 129 < 130 > 131 132 133 134 135 136 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed