Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 125

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 119 120 121 122 123 124 < 125 > 126 127 128 129 130 131 .. 278 >> Следующая

В тех случаях, когда сродство ингибитора к ферменту очень велико, используемые в опытах по определению К концентрации фермента и ингибитора оказываются сравнимыми, и допущение, лежащее в основе выводов выражений для ингибирования о постоянстве концентрации ингибитора ([11»[Е11), неприменимо. В этом случае для неконкурентного торможения можно определить величину й( из уравнения [25411:
[II
1
Г-+ [Е]о-
1-а а
где а = и{/и, т.е. отношение скорости в присутствии ингибитора к скорости в его отсутствие. Наклон графика в координатах [IWI-а от 1/а будет равен Я(. Известны и другие типы анализа таких систем [2425, с.80; 25421.
Сложные случаи смешанных типов ингибирования предложено [25431 анализировать методом вэкторной й^-У^^-системы координат. В этом случае строят зависимости кажущихся значений iT и для разных концентраций ингибитора и по положению и величине получающейся прямой (вектора) судят о типе ингибирования. Этот же мгтод можно использовать для исследования активации ферментов.
Часто бывает полезно проанализировать взаимные отношения двух ииибито ров одного и того же фермента. Два ингибитора будут взаимонзаавииямыми, если они могут одновременно связываться с активным центром фермента. Вгаимо-зависимые ингибиторы вытесняют один другого [25441. Различать эти чшы ин-гибвдювашя можно, строя графики и/и( от [1110 при постоянной концентрации второго шгкбитора (рис.83). Для случая взаимозависимого ингибирования
[1_1 [IJ
2 о 1 о
V/Vt = 1 +
(Я{)2 (Я{>1
а для взаимонезависимых ингибиторов
[1,1 [I_ 1
1 о 2 о
V/V = (1 + ------------)(1 + ----------).
(V, (Я()2
v_
v.
[/г] = consi
= const

о
Рис.83. Определение взаимной зависимости действия двух жгибкгоров на ферментативную реакцию
1- отсутствие второго ингибитора;
2- взаимозависимое и
3- взаимонезависимое действие второго ингибитора
Необратимое ингибирование. Необходимо различать два типа необратимых ингибиторов: не
обладающие сродством к ферменту и обладающие сродством (аффинные) ингибиторы. В первом слу-
о
чае реакция ингибитора с ферментом описывается как реакция второго порядка или, если ингибитор берется в большом избытке, как реакция псевдопервого порядка (см. обзор: [25451).
В случае аффинных ингибиторов последний сначала образует комплекс с ферментом, и затем фермент-ингибиторный комплекс превращается в необратимо инактивированный фермент:
Ki bi
Е + I ----- EI----> E-I. (34)
В том случае, когда равновесие устанавливается быстрее, чем происходит химическая инактивация, скорость изменения активности фермента описывается уравнением (35), аналогичным уравнению Михаэлиса-Ментен:
„г™ *ЛЕ] [II
dLi.J too
V =--------= -------------. (35)
Определить &(и К( можно, измерив начальные скорости инактивации при различных концентрациях Ш и строя график 1 от- 1/EI1 , где =
о эксп о экоп
t [I]0/К4 + [13о [25461. Анализ теории и методов определения констант скорости необратимого ингибирования дан в работах [2547,25481.
Предложено также несколько способов определения числа функционально важных остатков фермента из данных по их химической модификации [2549-25511. Так, согласно [25501, доля остаточной активности фермента (а) и число важных для активности остатков (I) связаны выражением:
где N - общее число остатков данного типа в белке, Р - число медленно модифицируемых остатков, среди которых I остатков важны для активности, и S -число быстро модифицируемых остатков, несущественных для активности.
5.9.2. Неспецич-теские ингибиторы
Большую группу органических соединений, подавляющих активность амидгидролаз, можно назвать неспецифическими ингибиторами, поскольку их строение су-
cLt
щественно отличается от строения субстратов, а их действие обусловлено некоторыми общими для них физике -х~лмическими свойствами. Эти ингибиторы могут подавлять активность очень многих амидгидролаз, активные центры которых проявляют гидрофобные свойства или несут заряд. Как и многие другие проблемы химии амидгидролаз, их ингибирование наиболее подробно изучено на примере сериновых протеаз - химотрипсина, трингина, эластазы и др.
К неспецифическим ингибиторам можно в первую очередь отнести ароматические соединения, действие которых на химотрипсин было подробно исследовано еще в 1963 г. [25523. Было испытано 130 соединений, относящихся к производным бензола, пиридина, нафталина и др. Все эти соединения характеризуются константой ингибирования химотрипсинового катализа порядка 1-1СГг-1•1СГ3 М. Связывание циклогексанола заметно слабее (К{=29 мМ [25533) по сравнению с фенолом (К(=3,5 мМ [25543), что указывает на плоский характер связывающего участка фермента.
Предыдущая << 1 .. 119 120 121 122 123 124 < 125 > 126 127 128 129 130 131 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed