Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 121

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 115 116 117 118 119 120 < 121 > 122 123 124 125 126 127 .. 278 >> Следующая

Таблица 57. Термодинамические параметры комплексообразования химотрипсина (pH 7,8)
Лиганд Метод ДЯ , ? & Литера
о CD 0 турный
ккал/моль источник
Профлавин Кинетический -8,0 -6 [2469] •
Калориме триче ский -11,3 -18 [2468]
Ас-Х-Тгр Кинетический -9,06 -21 [2469]
Калориметрический -21 ,2 -61 [2468]
Ao-D-Trp Кине тиче ский -10,0 -23 [2469]
Калориметрический -19,0 -52 [2468]
Интересно, что связывание перечисленных в табл.57 лигандов модифицированными препаратами химотрипсина - Ые2-метилгистидин-57-а-химотрипсином или ангидрохимотрипсином - характеризуется примерно на 10 ккал/моль меньшей энтальпией и на 30 э.е. большим значением энтропии [2469]. Термодинамические параметры связывания в этих случаях близки к величинам, характерным для пе-
реноса ароматических соединений из воды в неполярную фазу (дЯо«0). Сходные параметры наблюдаются для связывания гидрофобных соединений трипсином [2470] и связывания субстратов пепсином [1907].
Как и для каталитических констант, отмечаются случаи нелинейной зависимости констант связывания от температуры (см., например: [24711).
Измерения зависимости каталитических констант амидгидролаз от давления сравнительно немногочисленны (см., например: [2460,2472,24731). В качестве примеров можно указать на изменения объема связывания субстратов термолизином и нейтральной протеазой Bacillus subtllls, которые в случае первого, термостабильного фермента составляют -20*-30 см3-моль-1, а во втором случае близки к нулю [24601. Измерения hV* гидролиза химотрипсином ди- и три-пептид-п-нитроанилидов позволяют составить представление о числе водородных связей, образуемых субстратами в переходном состоянии, причем эти результаты хорошо согласуются с кристаллографическими данными [23351-
5.6.3. Компенсационный эффект
С эффектом компенсации мы уже сталкивались при рассмотрении специфичности субстратов химотрипсина. Это явление обнаруживается и при изучении многих других процессов [2450,2474-24761.
Термодинамический компенсационный эффект заключается в линейной зависимости изменений энтальпии (дй{) и энтропии (aS{) в ряду сходных процессов, происходящих при постоянной температуре, т.е.
дЯ( = а + TcaS(, (22)
где а и TQ - постоянные, причем Тс имеет размерность температуры и называется температурой компенсации. Из этого определения следует, что свободная энергия в ряду исследуемых превращений остается постоянной. Коэффициент а-=еЛt~TcASt и является изменением свободной энергии при температуре компенсации.
Компенсационный эффект обнаруживается при многих ферментативных реакциях, как, например, в случае катализируемого химотрипсином гидролиза этилового эфира ацетилтриптофана при разных pH (рис.79) и многих других случаях.
Следует различать два типа компенсационных эффектов. Один, так называемый полный компенсационный эффект, имеет температуру компенсации, близкую к температуре'эксперимента. Этот тип эффекта, по-видимому, является артефактом, обусловленным близкими значениями измеряемых параметров (констант равновесия и скорости) в относительно узком диапазоне температур и неизбежными при этом ошибками. Поскольку в этом случае измеряемая величина, например константа равновесия
К = ё~1Г е~вт~ , (23)
является произведением двух сомножителей, то при ?«const всегда будет наблюдаться компенсация дS( и дй{.
Однако, есть компенсационные эффекты с температурой компенсации, не сов-
АН° ккал/моль -10
- 9
- 8 - 7
Л Н°ккал/моль
_ 7 _________1_____I.. I_______1_____I_____I_____I______I_____I_____I
-iz-14 -16-18 -го-гг -гн-ге &з°э.е.
Рис.79. Компенсационные графики образования комплекса Микаэлисa (ES) и ацилфермента (ЕА) в коде гидролиза этилового ефира ГГ-ацетил-Ь-триптофана а-химотрипсином при различных pH [2476]
падающей с температурой измерений и характеризующиеся малым разбросом точек. Существующие объяснения этих процессов [24761 связывают явление компенсации с изменением (деформированием и разрушением) структуры воды вблизи реагирующей макромолекулы. Эта точка зрения не разделяется другими ис -следователями, считающими, что компенсационные эффекты любого типа являются следствием "неправильного применения некоторых уравнений равновесной термодинамики" [2450, с.1201. Таким образом, природа компенсационного эффекта остается открытым вопросом.
5.6.4. Температурная устойчивость амидгидролаз.
Термостабильные ферменты
Как уже указывалось, ферментативные реакции подчиняются уравнению Аррениуса (и другим термодинамическим зависимостям) в довольно узком интервале температур. Обычно при температурах, превышающих 40-45°С, наблюдается весьма резкое падение скорости реакции и увеличение констант диссоциации фермент-лигандных комплексов. Это обусловлено явлениями термической денатурации ферментов (рис.80) [2477,2478].
Предыдущая << 1 .. 115 116 117 118 119 120 < 121 > 122 123 124 125 126 127 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed