Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Капровский, Карп, Нортон, Чоен. Плоткин (Koprovski. Carp, Norton, Cohen, Piotkin, 1960) пассировали свежевыделенный штамм W-1 в культуре клеток почек обезьян при 25° (10 пассажей), затем при 23° (5 пассажей), после чего популяцию из негативной колонии продолжали пассировать при 23е. В ходе пассажей установлен переход MS'-признака в MS— и значительное снижение вирулентности для обезьян.
СТАТИСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ
ИССЛЕДОВАНИЯ
В большинстве случаев концентрацию вируса в исследуемом материале принято выражать количеством 50% тканевых цито-патогенных доз, содержащихся в 1 мл или в 1 г (ТЦД50/мл или ТЦДбо/г) исследуемого материала. Доза, которая дает 50% эффект (ЕДйо). выбрана в качестве единицы измерения по аналогии с экспериментами на животных. В этих экспериментах при использовании различных фармакологических препаратов, а так-
же бактерий и вирусов было показано, что величина ЕДво наиболее точно характеризует реакцию животных на введение исследуемого биологического агента [М. Л. Беленький, 1959; Б. С. Бессмертный, Г. Я. Коган, Е. Я. Микулинская, 1956; Ш. Д. Мошковский, 1936; Тизано (Tizzano, 1956)].
Существует довольно много методов вычисления ЕДб0: метод пробитов Блисса (Bliss, 1938); Литчфилда — Фертига (Litchfield, Ferting, 1941); Рида и Менча (Reed, Muench, 1938); Томпсона (Thompson, 1947); Кербера (Karber, 1931); Першина (1950), Уорсестер—Уилсона (Worcester, Wilson, 1943) и др.
В 1958 г. Комитет экспертов по полиомиелиту Всемирной Организации Здравоохранения рекомендовал при вычислении ТЦД50/МЛ использовать метод Рида и Менча и метод Кербера.
Метод, широко известный среди микробиологов и вирусологов как метод Рида и Менча, был разработан Беренсом еще в 1929 г.
Учитывая, однако, что рассматриваемый метод вошел в мировую литературу как метод Рида и Менча, при дальнейшем изложении мы будем придерживаться общепринятой терминологии.
В основу метода Рида и Менча положен так называемый принцип кумуляции. Сущность этого принципа сводится к предположению, что животные, которые погибли при заражении меньшими дозами, неизбежно должны погибнуть при введении больших доз вируса. И, наоборот, животные, оставшиеся живыми после инокуляции данного разведения инфекционного материала, не погибли, если бы их заражали меньшими концентрациями исследуемого агента. Применение приведенных выше рассуждений в отношении конкретного примера означает, что при определении числа выживших или погибших животных после заражения данной дозой принимают во внимание не только особи, которым ввели интересующую нас дозу, но и те, которые погибли или выжили при испытании всех взятых в опыт разведений. Таким образом, при экспериментах с ограниченным числом животных искусственно, на основе логической предпосылки, увеличивается объем наблюдений, что позволяет весьма существенно повысить точность получаемых данных.
"“Прежде чем изложить технику вычисления по методу Рида и Менча, остановимся на тех условиях, соблюдение которых обязательно при данном методе. Принцип кумуляции предполагает, Дчто интервалы между всеми исследуемыми дозами представляют одинаковую величину (обычно при титровании вирусов разница между логарифмами дйух соседних доз составляет 0,5 или 1). При вирусологических исследованиях важно, чтобы каждым ис-следуемым разведением вируса заражалось равное число жи-вотных, к сожалению, это требование не всегда выполняется, Беренс (1929) рекомендовал использовать не менее 6 особей для испытания одной дозы, однако, в последующем стали ограничиваться 4 животными. Попытки некоторых авторов ограничиться
лишь 3 пробирками с культурой ткани или 3 подопытными животными следует признать неверными. Достигаемая при этом экономия является ложной, так как получаемые при данных ограничениях опыта большие колебания значений ED50 нередко требуют проведения повторных исследований. При расчетах по методу Рида и Менча необходимо обращать внимание на симметричное расположение величин, характеризующих реакцию биологического объекта на введение агента. Б, С. Бессмертный (1957) подчеркивает, что вычисление ED50 из кумулированных данных можно производить только в том случае, если испытывались дозы, давшие от 0 до 100% или от 10—90, или 20—80% эффекта. Дозы, располагающиеся несимметрично, учитывать не следует.
Значения ED50 при использовании метода Рида и Менча определяют прямолинейной интерполяцией. Интерполирование проводят между двумя дозами, которые вызывают эффект, наиболее близкий к 50%. Одна из этих доз должна обусловливать эффект больше 50% (доза В), другая — меньше (доза А).
Расчет производится по формуле:
lg ED50=lg S + ^d,
b-a
где: В —доза, дающая эффект больше 50%,
Ь — эффект дозы В, в процентах, а — эффект дозы А, в процентах, d — интервал между логарифмами двух соседних доз.
Таблица 27
Протокол титрования вируса полиомиелита в однослойной культуре ткани клеток почек обезьян
