Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Сюн и Мельник (1958) подтвердили в принципе факт корреляции между вирулентностью вирусов полиомиелита и их способностью вызывать появление бляшки под покрытием с различными концентрациями соды. Однако в ходе исследований было выяснено, что образование бляшек штаммами с различной вирулентностью зависит не от pH агарового покрытия, а от концентрации соды.
Недавно В. И. Агол, М. Я. Чумакова (1961) сообщили, что проявление d-признака авирулентных штаммов связано с наличием в покрытии ионов Na+ , а не NaHC03: d-вариант под «кислым» агаром вызывает появление такого же числа бляшек, что и пол «щелочным», если достигнута необходимая концентра-
Сюн и Мельник (1958) значительно упростили методику выявления вирулентных и авирулентных линий вируса полиомиелита в культуре ткани. Они предложили использовать клетки, выращенные в плоских флаконах с резиновой пробкой. При использовании таких культур содержание соды в агаровом покрытии должно составлять 0,11 или 0,45 г на 100 мл; в состав покрытия, кроме соды, входят 5% агара в растворе Эрл а. 2% телячьей сыворотки и 0,0017% нейтрального красного.
Авирулентные штаммы под агаром с низкой концентрацией соды вызывали образование значительно меньшего числа бляшек, чем в опытах с покрытием, содержавшим в 4 раза больше бикарбоната натрия (d-признак). При исследовании патогенных штаммов такого различия в большинстве случаев не отмечали. Это свойство штамма обозначают символом d 1 .
По указанной методике была изучена значительная группа штаммов вирусов полиомиелита, выделенных от людей. Одновременно эти штаммы исследовали на обезьянах. Из 20 штаммов, обладающих d-признаком, ни один не вызывал заболевания у макак-резус при интрацеребральном заражении. В то же время строгой корреляцией между d^-свойством вируса и результатами его исследования на обезьянах обнаружить не удалось. Из
12 d + -штаммов 5 оказались непатогенными.
Канда и Мельник (1959) недавно описали новый метод диф-ференцировки аттенуированных и вирулентных вирусов полиомиелита. Они установили, что авирулентные штаммы не образуют совсем или образуют очень мелкие колонии в однослойных культурах стабильных клеток почечного эпителия обезьян (клетки MS). Это свойство было обозначено символом MS. Вирулентные штаммы на тех же клетках вызывали появление крупных бляшек (MS + -признак) диаметром 3—5 мм. MS- и MS + -штаммы не 'отличались друг от друга по способности адсорбироваться на первичных культурах клеток почек обезьян, а также по величине среднего времени созревания вируса. Однако урожай на одну клетку при исследовании штаммов MS + оказался в 100— 200 раз больше но сравнению с урожаем штаммов типа MS.
При сопоставлении признаков MS, MS + и d, d + с вирулентностью штаммов для обезьян были получены интересные данные. Оказалось, что штаммы с высокой патогенностью для обезьян обладали MS +-и d +-признаками. Авирулентные штаммы имели MS-и d+-признаки. Штаммы типа MS, d + характеризовались высокой или средней степенью аттенуации.
При изучении 16 свежевыделенных штаммов III типа были обнаружены вирусы как с MS ± -, d : -признаками, так и с MS-, d +-признаками. При исследовании на обезьянах одного из этих вирусов с MS +-, d : -признаками, а другого с MS-, d+ -признаками установлено, что первый агент является вирулентным даже при инокуляции в мышцу, тогда как второй не вызывал заболевания даже при введении в головной мозг.
В последние годы были проведены подробные исследования связи между различными выявляемыми in vitro свойствами и вирулентностью возбудителя полиомиелита. Это обусловлено стремлением получить надежные методы быстрого и экономичного определения вирулентности вирусов полиомиелита, выделяемых из кишечника человека в период применения живой вакцины.
Кабассо, Янгерер, Левине, Мойер, Рока-Гарсиа, Кокс (Cabas-so, Jungherer, Levine, Moyer, Roca-Carcia, Cox, 1960) изучали патогенность для обезьян при интрацеребральном введении вирусов полиомиелита типа I, II и III, используемых фирмой Ле-дерли в качестве живой вакцины. Количественную оценку патогистологических изменений проводили по методике Мельника в модификации авторов: высчитывали процент обезьян, у которых 1>осле заражения пораженные нейроны обнаруживались в головном и спинном мозгу. Эти данные сопоставляли с результатами исследования d-, t- и MS-признаков. После введения вируса типа I распространенные морфологические поражения обнаружили в 21% случаев, при опытах с вирусом типа II—в 57%, с вирусом типа III—в 16% случаев. В то же время вирус типа I характеризовался признаками d + , t—, MS-1-; типа II — d*, t~, MS~; типа III — d + , t—, MS;,;. Таким образом, у вируса типа
II была наиболее выраженная патогенность для обезьян, но в то же время этот вирус обладал признаками MS™, t— и d , которые чаще выявляются у авирулентных форм.
Авторы селекционировали 4 варианта штамма LSc. Первый вариант обладал d—-, t~~-, М5~-свойствами, второй — d4,
t", MS-, третий — d~ t+, MS , четвертый — d + , t+, MS ".Изучение этих вариантов показало, что между d- и MS-признаками и вирулентностью для обезьян нет никакой связи.
