Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Размеры бляшек отличаются не только у различных вирусов, но и несколько штаммов одного вируса могут образовать неодинаковые по величине колонии. Дюбос (1956) исследовал размеры бляшек 11 штаммов вирусов полиомиелита типа I, II и III. При этом было установлено, что на 4-й день после внесения вируссодержащего материала в культуре намечаются различия в диаметре бляшек как среди гетерологических вирусов, так и среди штаммов вируса одного типа.
Янгнер (1956) также отметил, что вирусы полиомиелита типа
I, II и III вызывают образование бляшек, размеры которых весьма существенно отличаются друг от друга. Диаметр колоний вируса I типа (штамм Махони) на 6-й день достигал 25—30 мм, размеры бляшек вируса III типа (штамм Сокетт) не превышали 10—15 мм. Штамм МЕФ (II тип) занимал промежуточное положение. Янгнер предполагает, что при прочих равных условиях различия в размерах бляшек можно, по-видимому, объяснить неодинаковым образованием в одной клетке частиц вируса полиомиелита I, II и III типа.
Необходимо подчеркнуть, что на число бляшек, их размеры и сроки появления большое влияние оказывают условия постановки опыта.
Такемори, Номура и др. (Такетоп, Nomura et al„ 1957) изучили действие ингибиторов вируса полиомиелита, содержащихся в нормальной бычьей сыворотке, на образование бляшек в культурах клеток HeLa и клеток почек обезьян. Оказалось, что культивирование вируса полиомиелита типа II на клетках HeLa в присутствии сыворотки, содержащей ингибиторы, приводит к селекции мутантов, которые на этих же клетках вызывают появление очень мелких (не более 0,5 мм в диаметре) колоний. Присутствие ингибиторов в агаровом покрытии приводит к тому, что образование бляшек происходит лишь за счет частичек вируса, устойчивых к их действию.
Недавно Такемото и Хабел (Takemoto, Habcl, 1959) показали, что в нормальной лошадиной сыворотке могут содержаться специфические ингибиторы вируса полиомиелита I типа. При внесении в культуры HeLa покрытия, содержащего сыворотку с та-
кими ингибиторами, отмечали задержку появления бляшек на 24—48 часов, причем образовавшиеся бляшки имели диаметр 2—4 мм. При увеличении концентрации сыворотки до 5% число колоний уменьшилось на 5%.
Л. Г. Степановой (1959) была изучена чувствительность клеток почек обезьяны макак резус и перевиваемых штаммов клеток СОЦ и Нер-2 к вирусу полиомиелита типа I (штамм Брун-ден). При титровании методом бляшек наиболее высокие величины получены в однослойных культурах Нер-2. Число бляшкообразующих доз при использовании этих клеток примерно в
10 раз превышало число бляшек в опытах с клетками почечного эпителия или СОЦ (табл. 26).
Таблица 26
Титрование методом бляшек вируса полиомиелита типа I (штамм Брундеи) в разных культурах ткани
Вил клеток Титр вируса
Почечный эпителий 109* ю5 107'5
обезьян .....
СОЦ ....... 10s ю9 ю7-9
Нер-2...... 109,8 109,R 10®,л
* Число бляшкообразующих доз в 1 мл.
Дарнелл и Сойер (1958) изучали образование бляшек вируса полиомиелита в однослойных культурах «неочищенного» штамма клеток HeLa, в культурах чистой линии клеток, полученной Паком и Фишером, а также в колониях, выделенных из популяции данных штаммов. Оказалось, что линии клеток HeLa 1—2, HeLa 1—3 и т. д. не отличались в 4 случаях из пяти по чувствительности к вирусу и размерам образуемых в них колоний от исходного штамма HeLa 1. В то же время отмечено, что при заражении чистой линии клеток и выделенных из нее колоний образовалось меньшее число бляшек, чем при экспериментах с клетками HeLa 1, HeLa 1—2, HeLa 1—3 и т. д. В культурах неочищенных клеток HeLa в большинстве клонов HeLa 1—2, HeLa 1—3 и т. д. образуются бляшки диаметром 3 мм, в клеточных линиях HeLa 3, HeLa 3—1, HeLa 3—2 и т. д., как правило, появляются более крупные колонии, размеры которых доходят до 5 мм.
Делбекко и Фогт (1955) описали линию вируса полиомиелита I типа, которая вызывает образование крупных бляшек под слоем агара, содержащего либо куриный эмбриональный экстракт, либо обезьянью сыворотку. При экспериментах с диким штаммом наблюдали появление крупных бляшек только в тех
случаях, когда в состав покрытия вводили обезьянью сыворотку.
В то же время в присутствии куриного эмбрионального экстракта колонии этого штамма имели небольшой диаметр.
Необходимо отметить, что присутствие сыворотки в агаре не является обязательным для получения колоний вируса. Раппапорт (1956) изучала образование бляшек вируса полиомиелита в культурах клеток почек обезьян под агаровым покрытием с нормальной бычьей сывороткой и в культурах с покрытием, свободным от белков, но содержавшим набор аминокислот1. При экспериментах со штаммом Брунгильда (I типа) не было отмечено никаких различий в числе и сроках появления бляшек при использовании покрытия с сывороткой или без нее. Иные результаты были получены при испытании штаммов вируса полиомиелита II и III типа (MEF, Соккет). В культурах почечного эпителия под слоем агара без сыворотки эти штаммы вызывали образование примерно в 2 раза большего числа колоний, чем в клетках с покрытием, содержащим сыворотку. Наличие аминокислот в агаре не только вело к увеличению числа бляшек, но и стимулировало более раннее их появление.
