Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
И к осадку клеток прибавляли свежеприготовленную среду. Клеточную взвесь разводили, начиная с концентрации 400 000, до 6250 клеток в 1 мл питательной среды.
На каждое разведение клеток брали по 2—4 пробирки размером 15x130 мм, затем в них добавляли 0,5—0,8 мл стерильного вазелинового масла и в вертикальном положении помещали ь термостат при температуре 36—37°.
Таблица 18
Метаболическая активность четырех культур клеток
Культура № pH среды
при числе клеток в 1 мл питательной среды, Х101
400 зоо 250 , 200 150 100 76 60 25 12,5 6,25
1 6.8 6,8 6,85 6,85 6,8 7,0 7,2 7,3 7.5 7.6 7,6
2 6,8 6,8 6.8 6.8 6,8 6,8 7,3 7,2 7,5 7,6 7,7
Клетки 3 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7,2 7.3 7,5 7.6 7.7
4 6,8 68 6.8 6,8 6,8 6,9 7.1 7,2 7,3 7,5 7,6
почек 5 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7,1 7,2 7.3 7,4 7.5
обезьян 6 6,8 6.8 6.8 6.8 6,8 6,8 7,1 7.3 7,* 7,4 7,6
7 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7.0 7,2 7,2 7,4 7,4 7,6
8 6,8 6.8 6,8 6,8 6.8 6,8 7,1 7,3 7,4 7.4 7,7
1 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7,1 7,3 7,4 7,5 7,6
2 6.8 6,8 6.8 6,8 6.9 7,1 7,2 7,4 7,5 7.7 7,7
Штамм 3 6,8 6.8 6,8 6,8 6,8 6,8 7,1 7,3 7,4 7,5 7,6
4 6.8 6,8 6.8 6.8 6,8 6,8 7,1 7.2 7,3 7,5 7,7
клеток 5 6,8 68 6,8 6,8 6,8 7,0 7,2 7.3 7,4 7,6 7,7
СОЦ 6 6,8 6,8 6.8 6.8 6,8 6,8 7,1 7,2 7,3 7,5 7.6
7 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6.9 7,2 7,3 7.4 7,6 7,7
8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7.2 7,3 7,3 7,4 7,5
1 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,9 7,1 7,2 7,3 7,4 7.6
2 6.8 6,8 6,8 6.8 6,9 7.1 7,2 7,3 7,4 7,5 7,6
Штамм 3 6,8 6,8 6 8 6,8 6.8 6,9 7,2 7,3 7.4 7,5 7,6
4 6,8 6.8 6,8 6,8 6,8 6,9 7,1 7,3 7,4 7,5 7.6
клеток 5 6.8 6.8 6,8 6,8 6.8 7,1 7.2 7.3 7.4 7,5 7.6
Нер-2 6 6.8 6.8 6,8 6,8 6.8 6,9 7.2 7,4 7.6 7,7 7.7
7 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,9 7,2 7,3 7,5 7,6 7,6
8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7,1 7,3 7,4 7,5 7,6 7,6
1 6.8 6,8 6,8 6,8 7.1 7,2 7,3 7,6 7,6 7,7 7,7
2 6,8 6,8 6,8 6.8 6,8 6,8 7.1 7,2 7,4 7,6 7,6
Штамм 3 6,8 6,8 6,8 6,8 7,1 7,2 7.3 7,5 7,6 7,6 7,7
4 6,8 7,1 7,2 7,3 7,5 7,6 7,6 7.6 7,6 7,6 7,6
клеток 5 6,8 6,8 6,8 6.8 7,1 7,2 7.3 7,45 7,6 7,6 7.6
HeLa 6 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 6.8 6,8 7,1 7,4 7,6 7.7
7 6,8 6.8 6,8 6,8 6,9 7,2 7.3 7,3 7,4 7,5 7,6
8 6,8 6,8 6,8 6,8 6,8 7,1 7,3 7,4 7,3 7,6 7,6
Чтение реакции производили на следующий день. Минимальное количество клеток, способных в результате своей жизнедея' гельности при температуре 36е за 24 часа изменить pH среды до 7,1 и ниже (желтый цвет), принимается за дозу (титр) клеток.
Результаты исследований приведены в табл. 18.
Полученные данные свидетельствуют, что титр клеток почек обезьян в 7 опытах из 8 был равен 100 ООО клеток в 1 мл питательной среды и только в одном равнялся 150 000 клеток. Таким образом, метаболическая активность этих клеток практически оставалась постоянной во всех опытах.
Титр клеток штамма СОЦ в 6 опытах из 8 равнялся 100 000 клеток в 1 мл, а в 2 опытах— 150 000 клеток.
Для клеток штамма Нер-2 титр определялся в 5 опытах из 8 в количестве 100 000 в 1 мл, а в 3 опытах — 150 000 клеток в I мл.
Таким образом, метаболическая активность клеток штамма СОЦ и Нер-2 колебалась незначительно — в пределах 100000— 150 000 клеток в 1 мл питательной среды. Достаточная стабильность физиологической активности позволяет рекомендовать клетки штаммов СОЦ и Нер-2 для постановки цветной реакции.
,При изучении метаболической активности исследуемых линий клеток особого внимания заслуживают клетки штамма HeLa.
Титр клеток из 8 представленных опытов в одном равнялся 300 000 клеткам в 1 мл, в 3 опытах — 200 000, в 2 опытах — 150 000, в одном опыте—100 000 и в последнем опыте — 75 000 клеток в 1 мл. Следовательно, метаболическая активность клеток штамма HeLa колебалась в широком диапазоне. Клетки штамма можно использовать для постановки цветной реакции лишь после проверки метаболической активности клеток, которую необходимо производить перед каждым опытом.
Ниже мы описываем титрование вируса полиомиелита в цветной реакции, в которой были использованы культуры клеток почек обезьяны и перевиваемые клетки СОЦ, Нер-2 и HeLa.
ИНГРЕДИЕНТЫ ДАННОЙ РЕАКЦИИ
Клетки. Из матрасов е однослойной культурой хорошо выросших клеток удаляют старую питательную среду и вносят 0,02% раствор версена, подогретого до 37°, таким образом, чтобы слой клеток был покрыт этим раствором. Обычно в матрас Ру наливают 50 мл раствора версена. Матрасы помещают в термостат при 35—37° и выдерживают 30—45 минут, причем каждые 10 минут матрасы встряхивают. Для того чтобы клетки лучше отслаивались от стекла матраса, необходимо добавлять версен к культурам, не охлажденным при комнатной температуре.
