Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
пробирок с культурами клеток для заражения смесями аналогична изложенной выше (см. Титрование вируса), ¦и-''
При постановке реакции нейтрализации вируса необходимы следующие контрол и.
1. Контроль токсичности сывороток. Наименьшее разведение каждой сыворотки, использованное в реакции, добавляют в количестве 0,1 мл в 4 пробирки с растущей тканью. Объем жидкости в пробирках доводят добавлением питательной среды до 1 мл.
2. Контроль дозы вируса, взятой в опыт, осуществляют титрованием вируса. Для этого пробирки с культурой ткани заражают 0,1; 1; Ю; 100 и 1000 ТЩЦо вируса в 0,1 мл. На каждую дозу берут по 4 пробирки. После заражения в каждую из них добавляют по 0,9 мл питательной среды.
3. Контроль ткани. Не менее 4 пробирок с культурой ткани оставляют незараженными для выявления возможной неспецифической дегенерации клеток. Все опытные и контрольные пробирки инкубируют в стационарном положении под углом в 5° при температуре 36—37°. На 4—6-е сутки пробирки с культурами просматривают под малым увеличением микроскопа. Сначала проверяют контрольные пробирки, в которых клетки должны быть нормальными, без дегенеративных изменений. Затем просматривают контроль дозы вируса, который позволяет определить действительное количество ТЦД50 вируса, взятое в опыт.
^ Титром сыворотки считают то наибольшее ее разведение, которое предотвращает дегенерацию клеток в половине инокулиро-ванных пробирок. Титр сыворотки выражают в виде lg2- В качестве примера в табл. 14 приведен протокол титрования сыворотки В. В реакцию нейтрализации были взяты вирус I типа в разведении 10~4, II типа — 10~ад и III типа—10‘"5. Эти разведения вируса были взяты в реакцию в связи с тем, что по результатам предыдущих титрований в этих разведениях содержалось по 100 ТЦД50 вируса.
Из приведенных результатов опыта следует, что сыворотка В не токсична для культуры клеток. Спонтанной дегенерации клеток нет.
Из результатов контроля доз вирусов, взятых в реакцию, следует, что вирусы I и III типов в реакцию были взяты по 100 ТЦД50, а II типа —320 ТЦДБ0- Титр антител к I типу вируса равен 10 (lg2), так как сыворотка в разведении 1 : 1024 в половине пробирок из четырех нейтрализовала вирус, а в двух других вирус вызвал дегенерацию клеток. Титр антител ко II типу вируса равен 3,5, а антитела вируса к III типу в наименьшем разведении сыворотки, взятом в опыт (1:4), отсутствовали.
При титровании вирусов и антител по нитопатогенному действию необходимо учитывать морфологические особенности деструкции культур клеток, вызываемой различными вирусами. На неко-гооых из них мы остановимся ниже.
Таблица 14
Протокол титрования антител к вирусам полиомиелита в сыворотке В
Титрование сыворотки В
Тип Разведение сыворотки Титр
1 : 4 1 : 8 1 :16 1 :32 1 :64 1 :128 1 : 256 1 :512 1:1024 1 : 2G48
I --- г 4 4 +4 10
II -- -- 4 4- -U + + + + + + + _¦__|_ + 4 _L JL 3,5
+ + _|__ц + + + + -ь+ ¦4 + + 4- i i
"T +
III 4 + + + 4 + 4 + + + + + -J-4- 4 + + + _j---L <2
+ 4 44- + + 4 4 4Ч~ + + 4-4 ! 1
-H-
Контроль дозы вируса
Разведения вируса Титр
Тип 10-2,5 10-3 10 3,5 10-4 ,0-4.5 10“5 10-5.S 10-6 10-6.Б 10-7
вируса
i 4-4- + 'г + 4- It -- 10®
4 + 4 4
и 4 -J- 4-4 4 + -- I06
+ 4- 4-4- + -i-
ш 4 4 4 4- + -I- 4--b 106.5
-L -L -i-i +4
i I
Контроль ткани: дегенерации нет.
Контроль сыворотки: отсутствие токсичности.
Обозначения: + дегенерация клеток; — дегенерации нет.
Аденовирусы
Цитопатогенное действие, вызываемое аденовирусами, отличается некоторыми особенностями, знание которых необходимо для правильного учета результатов титрования на тканевых культурах. Как по срокам развития, так и по характеру дегенеративных изменений различают два типа цитопатогенного действия, вызываемого аденовирусами: 1) «раннее» цитопатогенное действие, выражающееся в образовании конгломератов клеток, их округлении и слущивании части клеточных элементов со стекла. Эти изменения не связаны с размножением вируса и обусловлены токсиноподоб-
