Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Далее возникает вопрос: каким образом нуклеиновая кислота перёд проникновением в клетку освобождается от вирусного белка; если принять положение о том, что вирусный белок в клетку не проникает?
В этой связи заслуживает внимания, но критического отношения интерсная гипотеза В. М. Жданова (В. М. Жданов, А. Г. Бук-ринская, 1961а, б) об энзимах клетки «раздевающих» вирус. Автор считает, что, когда вирусная частица достигает внешнего слоя эктоплазмы клетки, происходит разрушение белковых компонентов вируса, что можно легко обнаружить по исчезновению вирусных антигенов без нарушения инфекционной активности вирусной
нуклеиновой кислоты. Освобождение вирусной нуклеиновой кислоты от белковых покровов и разрушение последних осуществляются протеолитическими ферментами клетки. Эти «раздевающие» энзимы имеются лишь в клетках, чувствительных к данному вирусу, и отсутствуют в нечувствительн&х клетках. В. М. Жданов находит, что чувствительность клеток к данному вирусу связана с наличием в клетке протеаз, способных разрушать белковые компоненты вирусной частицы.
Однако для окончательного решения этого вопроса требуется дополнительное накопление фактов.
После проникновения в клетку вируса или его нуклеиновой кислоты начинается перестройка обмена клетки и синтез компонентов вируса. Этот период соответствует так называемой эклиптической фазе. В этой фазе нуклеиновая кислота не проявляет своей инфекционное™ (Пейн, Куртц, Аккерманн, 1958).
Наличие эклиптической фазы в процессе взаимодействия вируса с восприимчивой клеткой доказано для вирусов полиомиелита, гриппа, чумы кур, осповакцины, западного лошадиного энцефалита и др.
В этот период начинается репродукция компонентов вирусных частиц. Процесс размножения вирусов в пораженных клетках изучен (недостаточно и единого представления о нем у исследователей пока нет.
Барнет (1956) считает, что вирус гриппа выделяет в клетку нуклеиновую кислоту. Происходит контакт вирусной 'нуклеиновой кислоты со средой, обусловливающей образование белка в клетке. Клетка, приведенная в состояние необычной активности, начинает образовывать чужеродный для себя вирусный иуклеопротеид. Такая активность наблюдается в перенуклеарной зоне. Таким образом, воспроизводится .генетический компонент вируса (нуклеиновая кислота) и соматический компонент, соединяющиеся затем с липидами и полисахаридами клетки.
С целью определения, на каких территориях клетки и как происходит процесс репродукции вирусных нуклеиновых кислот и белка проведено значительное количество специальных исследований. В этих исследованиях используют 'различные методы, в частности гистохимические, радиоактивных изотопов, флуоресцирующие антитела, антитела, связанные с ферратином (Лох, Маассаб, Аккерманн (Loh, Maassab, Ackermann, 1957); Маассаб, Лох, Ак-керманн (Maassab, Loh, Ackermann, 1957); Бакли. 1956; Аккер-ма>нн, 1958; Хойл, Фриш-Ниггемейер (Hoyle, Frisch-Niggemeyer,
1955)].
Ряд исследований сопровождался определением вирусной активности отдельных элементов зараженной клетки.
Аккерманн, Лох и Пейн (1958) определили количество белка, РНК, ДНК и вируса в клетках HeLa, зараженных вирусом полиомиелита. Оказалось, что белок и РНК начинают накапливаться в цитоплазме клетки сразу же после ее заражения. Вирус появляет-
ся в клетках спустя 3 часа и количество его быстро увеличивается до 7-го часа. Авторы предполагают, что большая часть РНК и белка, появившихся в зараженной клетке, предназначена для включения их в вирусные частицы.
Таким образом, приведенные выше исследования позволяют считать, что основной процесс репродукции вируса происходит в цитоплазме, а не в ядре зараженной клетки.
По данным Аккерманна, при заражении клеток различными вирусами в клетках накапливается избыточное количество вновь сформированных белков и нуклеиновой кислоты невирусного типа. Можно предположить, что под влиянием вируса нарушается действующий в нормальных условиях принцип координации клеточного синтеза, в результате чего происходит несбалансированный рост, приводящий клетку к гибели. Вероятно, именно это, а не синтез в клетке небольшого количества чужеродного (вирусного) материала лежит в основе цитопатогенного действия.
Буклей (1956), применяя технику флуоресцирующих антител, показала, что антиген вируса полиомиелита в зараженной клетке обнаруживается впервые в цитоплазме. Только на более поздних стадиях инфекции клетки антиген фиксируется в области ядра.
При тщательном исследовании различных стадий инфекции клетки в ядре не удалось обнаружить более высокой концентрации инфекционного вируса, чем в цитоплазме клетки.
Ф. М. Кириллова (1961), используя эту же методику, изучила динамику накопления антигена вируса полиомиелита в клетках культуры ткани почки обезьяны и СОЦ. Антиген появляется вначале в цитоплазме, а в более поздние сроки обнаруживается в ядрах пораженных .клеток. Повышение концентрации антигена в клетке происходит параллельно нарастанию титра вируса в жидкой среде.
Для изучения места репродукции РНК и белка вируса полиомиелита в инфицированных клетках HeLa Леви (Levy) (1961) использовал метод флуоресцирующих антител и авторадиографии. В течение первых 3 часов инфекции был обнаружен больший, чем в контрольных клетках, синтез РНК в ядрышках зараженных клеток и более быстрое выделение этой РНК в цитоплазму. Выделяемая в цитоплазму РНК связывалась рибосомами. (Следует отметить, что биохимическими исследованиями давно доказана ответственность рибосом за синтез белка.) Спустя 5 часов после инфекции, ядрышко лишалось способности синтезировать РНК- Количество ДНК в зараженных клетках было таким же, как и в нормальных клетках. Общий белковый синтез в зараженных клетках понижен.
