Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Однако в ряде разделов вирусологии перевиваемые клетки нашли широкое применение, что в значительной мере объясняется преимуществами, которыми они обладают перед первичными трип-синизированными культурами. Основными из этих преимуществ являются следующие.
1. Использование перевиваемых клеток (в тех случаях, когда они могут быть полноценной заменой первичных культур) дает значительную экономию труда, времени и средств, затраты которых нередко весьма велики при использовании первичных трип-синизированных культур. Достаточно вспомнить, что для получения широко используемых в вирусологии культур почечных клеток обезьян необходимо доставлять этих дорогостоящих животных из тропических стран, затрачивать большие средства на их содержание, не говоря уже о том, что самый процесс приготовления первичных культур очень трудоемок.
2. Перевиваемые клетки обычно свободны от посторонних вирусов и других микроорганизмов, которые нередко присутствуют в первичных культурах, получаемых из органов животных (вирус
В, пенящие вирусы, микрофилярии, амебы и др.). Естественно, что присутствие посторонней вирусной и бактериальной микрофлоры может исказить результаты опытов и нередко заставляет браковать последние.
Работами ряда авторов показано, что некоторые вирусы [Роу, Хюбнер и др. (Rowe, Huebner et aL, 1953); Роу, Хартли и др. (Rowe, Hartly et al., 1956, 1957)], а также простейшие (амебы) [Халл, Миннер, Масколи (Hull, Minner, Mascoli, 1958)] обнаруживаются в первичных культурах тканей, полученных от здоровых животных, когда имелась возможность исключить занос указанных микроорганизмов с культуральной средой. Следует, однако, отметить, что хотя перевиваемые клетки сами по себе свободны ог латентного носительства вирусов, но последние могут быть занесены в культуру таким компонентом питательной среды, как сыворотка.
3. Как правило, перевиваемые клетки обладают более широким спектром чувствительности к различным вирусам, чем соответствующие первичные культуры. Так, многие перевиваемые клеточные штаммы, полученные из тканей так называемых естественно невосприимчивых к вирусам полиомиелита животных, оказались высокочувствительными к этой группе вирусов. В качестве примера можно привести следующие линии перевиваемых клеток: штамм ERK почечных клеток эмбриона кролика [Шеффилд, Чечер (Sheffield, Churcher, 1957)], линия перевиваемых почечных клеток взрослого кролика [Мак Карти, Тителл (McCarthy, Tytell, 1958)], штамм почечных клеток эмбриона коровы (Грейг, 1958) [Вьешанж, Морэн и де Бриен (Vieuchange, Maurin, de Brien, 1955)] и почечных клеток барана (В. И. Гаврилов, 1960), линия перевиваемых почечных клеток селезенки морской свинки [Масколи, Стэнфилд, Фелпс (Mascoli, Stanfield, Phelps, 1959)]. Известно также, насколько ограничен выбор первичных клеточных культур, чувствительных к вирусу кори. В то же время многие линии перевиваемых клеток чувствительны к этому агенту. Помимо штаммов раковых перевиваемых клеток (HeLa, Нер-2), кэтому вирусу чувствителен ряд линий перевиваемых клеток «нормального» происхождения: селезенки морской свинки (Масколи, Стэнфилд, Фелпс, 1959), штамм перевиваемых клеток, полученный из сердца куримого эмбриона [Шварц, Цирбел (Schwarz, Zirbel, 1959)], линии перевиваемых почечных клеток барана (В. И. Га.врилов, 1960) и кожно-мышечной ткани мышиного эмбриона (В. И. Гаврилов, Е. А. Щекочихина, 1960). Причины, обусловливающие появление чувствительности перевиваемых клеток к вирусам, к которым нечувствительны гомологические первичные клеточные культуры, неясны. По-видимому, в основе этого явления лежат глубокие физиологические изменения, претерпеваемые клетками при их адаптации к условиям непрерывного культивирования in vitro.
Нужно оговориться, что из этого общего правила отмечены отдельные исключения. Так, например, Майер, Майерова, Вильчек (Mayer, Mayerova, Vilcek, 1959) наблюдали снижение чувствительности .полученного ими штамма перевиваемых клеток амниона человека по сравнению с первичными культурами амниотических клеток к некоторым типам вирусов Коксаки и к вирусу простого герпеса.
Следует отметить, что иногда наблюдается определенная взаимосвязь между морфологическими особенностями перевиваемых клеток и их чувствительностью к тем или иным вирусам. По данным Сталберга, Пэйджа. Берман (Stulberg, Page, Berman, 1958), перевиваемые линии клеток человеческого происхождения по их морфологии можно подразделить на две группы: фибробластопо-добные (Fb-L) и эпителиоподобные (Ep-L), Для первых характерен широкий спектр чувствительности к вирусам труппы ECHO. Эпителиоподобные же линии чувствительны лишь к отдельным представителям группы ECHO. Например, фибробластоподобный
вариант клеток Детройт-196 оказался чувствительным ко всем вирусам ECHO с типа 1 по 16, за исключением вируса типа 10 Спектр чувствительности эпителиоподобной линии клеток Детройт-6 ограничивался только вирусами ECHO типа 6 и 10.
4. Некоторые линии перевиваемых клеток лучше переносят высокие концентрации антибиотиков, чем первичные культуры клеток. По-видимому, эта резистентность является приспособительным признаком, происхождение 'которого связано с условиями постоянного, на протяжении многих пассажей, контакта с анти-. биотиками (обычно пенициллином и стрептомицином), входящими в состав культуральной среды. Это обстоятельство может иметь немаловажное значение в тех случаях, когда перевиваемые клеткк используют для выделения вирусов из бактериально загрязненньи материалов, т. е. при необходимости предварительной их обработк* массивными концентрациями антибиотиков (В. И. Гаврилов, 1960)
