Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 31

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 101 >> Следующая

Количество клеток в 1 мл подсчитывают по формуле:
а-1000-2 0,9 ’
где X — число клеток в 1 мл; а — среднее число клеток в не-скольких пробах; 0,9 — объем камеры Горяева в кубических миллиметрах; 1000 — число кубических миллиметров в 1 см3; 2 — коэффициент разведения суспензии добавленным объемом краски.
В зависимости от результатов подсчета клеточную взвесь разводят питательной средой. Если клеточную взвесь предполагают засевать в 1,5-литровые матрасы Клинского завода, то в 1 мл должно содержаться 75 000 клеток, при засеве* в матрасы Ру— 100000, в пробирки — 400000.
В клинские матрасы емкостью 1,9 л с поверхностью, равной 266 см2, наливают по 200 мл взвеси указанной концентрации, иными словами, в один матрас вносят 15 млн. клеток. Для получения монослоя в матрасах Ру '(поверхность 160 см2) необходимо 100 мл взвеси, содержащей 10 млн. клеток. В пробирки наливают 0,5 мл клеточной взвеси.
Рис. 10. Однослойная культура клеток почки эмбриона свиньи. X 70.
Матрасы и пробирки после добавления клеток закрывают стерильными резиновыми пробками. Важно, чтобы пробки очень плотно подходили к горлу матрасов, иначе за счет поступления воздуха извне произойдет сдвиг pH среды в щелочную сторону. Последнее обстоятельство, как известно, неблагоприятно сказывается на росте клеток.
Клетки .выращивают при температуре 37° в стационарных условиях. Матрасы укладывают на стеллажах в горизонтальном положении, пробирки 'под углом в 5° к горизонтальной плоскости. Образование монослоя при указанных условиях отмечают на 5—7-й день (рис. 9, 10, 11).
В Советском Союзе систематические исследования по изучению механизма трипсинизации тканей и условий получения различных первичных однослойных культур клеток проводятся Е. М. Доссер с сотрудниками (1959, 1961).
В своих исследованиях авторы дают оценку ряду факторо* имеющих существенное значение при 'получении однослойны, культур тканей от человека и 8 видов животных.
Выход клеток при трипсинизации различных тканей зависит о вида ткани и -возраста животного.
Легочные и тестикулярные ткани, состоящие преимуществен но из фибробластоподобных клеток, обычно дают более высоки выходы, чем почечные, что связано с меньшим размером клеток и, возможно, с большей устойчивостью их к механическим трав мам и действию трипсина. Авторы отмечают, что важнейшей пред
Рис. 11. Однослойная культура кожно-мышечной ткани эмбриона человека. X 70.
посылкой в 'Получении однослойных культур тканей является под бор оптимальной посевной дозы в оптимальных условиях выра щивания.
Была изучена корреляция между величиной посевной дозы i потребностью клеток в белке. Данные, полученные Е. М. Доссе] с сотрудниками (табл. 5), демонстрируют довольно значительны' колебания в величине посевных доз и потребностях клеток в бел ке для отдельных тканей разных видов животных. Эти результа ты позволяют в определенных пределах компенсировать сниже ние количества белка увеличением посевной дозы клеток.
Возраст животного оказывает заметное влияние на выход кле ток и потенцию их роста.
Авторы 'Приводят данные (табл. 6), показывающие эту зависи мость {определение возраста производилось тю весу) на обезьянах
Чем моложе обезьяны, тем количество клеток больше. Обезья ны весом 700—900 г давали выход 72* 10е клеток, а свыше 5 кг — 30-106.
Корреляция между величиной посевной дозы и потребностью клеток в белке
Величина лосевной дозы X 10*
клеток на 1 пробирку
Вид ткани
количество сыворотки в среде, %
2 I 5 7 ! ю ! 20
Почка эмбриона человека . . . 300 200
Легкое » . ... 500
Амнион „ „ ... 400
Почка коровьего эмбриона . . . 300
Кожа „ ... 400
Легкое , » ... 500
Почка овечьего эмбриона . , 400 300
Легкое „ . . 500
Кожно-мышечная овечьего эм
бриона ........... 400
Эмбрион кролика ... ... 200
Эмбрион куриный ..... 250
Почка обезьяны...... 200 100
Тестикулы обезьяны ...... 250
Почки щенков собак 300
Тестикулы щенков собак .... 300
Почки кроликов ........ 500 ?00 300
Тестикулы кроликов . 300
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed