Общая аллергология - Адо А.Д.
Скачать (прямая ссылка):
Brocklehurst (1962) отметил параллелизм в появлении в перфузате легких гистамина и МРС. Однако гистамин выходит в перфузат очень быстро — в течение 1—2 мин; МРС в этот период еще не определяется. После начального выхода нарастание концентраций этих веществ происходит параллельно, достигая максимума на 16—32-й минуте, после чего их уровень прогрессивно уменьшается.
По-видимому, MPG освобождается из тучных клеток. Во время анафилактической реакции образование MPG происходит за счет ферментативной активности мембран тучных клеток, в то время как гистамин выходит из них в результате повышения проницаемости мембран.
На выход MPG влияют температура, pH, активность тканевых ферментов, количество антигена и т. д. Оптимальный pH для МРС составляет
8,5, т. с. примерно такой же, как для гистамипа. Ни МРС, пи гистамин пе выходит при pH выше 9,5 и ниже 5,6—6,3. Оба они разрушаются при нагревании до 45°С в течение 5—10 мин; оптимум их действия проявляется при температуре 37°С. Аиоксия задерживает выход и гистамина, и МРС.
, Paton (1951) обнаружил появление МРС в крови кошек и собак при введении им вещества 48/80. Изучение процессов освобождения гистамипа tL МРС у кошек и морских свинок при действии антигена и вещества 48/80 дает возможность заключить, что механизмы их появления очень близки. Riley (1958) считал, что предполагаемый фермент, вызывающий освобождение МРС, мог бы быть типа лецитиназы С.
; А. Д. Адо и JI. М. Ишимова (1964) исследовали условия образования 4: выделения МРС-А из легких сенсибилизированных животных при действии антигена на размельченные ткаии или при введении антигена в ток перфузии изолированного препарата легких.
Сенсибилизацию морских свинок проводили введением 0,2 мл лошадиной Ылворотки либо 0,2 мл разведенного в 5 раз нативного яичного белка
0з свежих куриных яиц. Аллергены вводили подкожно 3 раза с интервалами в один день. Животных брали в опыт на 20—36-й день после первой сенсибилизирующей инъекции.
Сенсибилизацию кроликов проводили инъекциями 1 мл сыворотки подкожно и с интервалами 5 дней 5—6 раз (до появления гиперергического воспаления). Животные поступали в опыт на 10—12-й день после последней ипъекции.
Для приготовления стандартного препарата МРС-А, необходимого в работе, пользовались методом Chakravarty (1959). Этот метод состоит в следующем: 15—20 морских свинок, сенсибилизированных яичным белком или лошадиной сывороткой, на 25—30-й день сенсибилизации убивают кровопусканием. Их легкие извлекают, обмывают жидкостью Тироде и размельчают ножницами иа мелкие кусочки (1—2 мм). Измельченную ткань дважды промывают теплым раствором Тироде и заливают тем же раствором из расчета 10 мл жидкости на 1 г сырой ткани. Сюда прибавляют аптигеп из расчета 1 мг/мл жидкости, стаканчики помещают в термостат иа 10 мип при 37°С.
Через 10 мин жидкость, содержащую МРС-А, отфильтровывают от кусочков легких через марлевый фильтр и подвергают лиофилъной сушке. Полученный сухой порошок экстрагируют 80% спиртом из расчета 5 мл на 1 г сырой ткаии. Алкогольный экстракт высушивают путем отгонки спирта в атмосфере азота при понижении давления и температуре 50— 55°С. Полученный материал сохраняют в виде сухой пудры в вакууме при —20°С. Перед опытом необходимое количество порошка растворяют в дистиллированной воде; раствор сохраняют в холодильнике.
Для определения активности стандарта МРС-А пользуются отрезком изолированной подвздошной кишки морской свинки, помещенной в аппарат Шульца — Дейля. Несколько раз испытывают чувствительность кишки к гистамину и ацетилхолину вплоть до установления постоянных сокращений иа малые дозы (0,1—0,01 мкг). Затем перфузию переключают на жидкость Тироде (или Кребса), содержащую дипразин (10~7) и атропин (10~6). Убедившись, что на гистамин и ацетилхолин реакция отсутст-
вует, в ванночку вводят известное количество приготовленного стандарта MPG-A. Через 15—60 с начинается сокращение кишки, которое медленно-нарастает, достигая максимума ко 2-й минуте; после отмывания кишка также медленно расслабляется. По данным Chakaravarty, препарат MPG-A является достаточно активным, если 10 ЕД его дают сокращение высотой от 40 до 70 мм.
Таким образом, проводят 3—4 испытания МРС. Интервалы между отдельными испытаниями должны быть не менее 4—5 мин.
Рис. 39. Содержание медленнореагируюгцей субстанции 'В перфузате изолированных легких.
Выход МРС из легких сенсибилизированных животных при действии антигена можно обнаружить в двух вариантах опытов: 1) при инкубации размельченных тканей легких с антигеном; 2) при перфузии изолированных легких жидкостью Тироде и введении в ток перфузии антигена.
В наших опытах легкие сенсибилизированных свинок извлекали, размельчали до частиц диаметром 1—2 мм, отмывали теплым раствором Тироде и заливали тем же раствором из расчета 10 мл на 1 г легких, добавляли аллерген — 0,5 мл сыворотки или 0,5 мл свежего яичного белка,, разведенного 2 : 5, на 1 г ткани. Взвесь легких помещали в термостат на 10 мин при температуре 37°С. Контрольную пробу (без антигена) такя-се-помещали в термостат.
